稀释涂布平板法和平板划线法适用条件

稀释涂布平板法是将菌液稀释成不同浓度，进行涂平板。平板划线法，是调单个菌落在平板上进行划线。两种方法都可以得到独立的菌株。稀释涂布平板法一般多用于筛选菌株，平板划线法一般多用于纯化菌株。其实两种方法在做细菌试验中都可以用到，不过划线法则相对简单些，直接挑菌划线，而涂平板则麻烦些还要摇菌稀释。

稀释倒平板就是倾注法，用于细菌菌落总数的计数，特点是：1、样品含量中的细菌一般不太多；2、对细菌菌落的形态没有要求；3、不要求分离细菌做纯培养（不要求知道里面含有的是哪种细菌，只要长出来就行的）；4、有相关的方法学标准；5、只适合营养要求不高的细菌计数。6、每个稀释度接种量一般为1ml。

涂抹法：用于细菌含量比较高，并且要求知道细菌菌落形态（只计数特定细菌）。最常见的是蜡样芽胞杆菌的计数（涂抹于MYP平板，只计数表面粗糙像蜡一样、周围有粉红色晕圈的菌落，并挑5个鉴定），用于食物中毒的确证，要达到一定菌量才可引起食物中毒。每个稀释度的接种量一般为01ml。

平板法分离培养的原理就是，平板上的一个单菌落都是由初始的一个微生物繁殖产生的，也就是说，一个单菌落里的所有微生物都是相同的。这样，在划线或稀释涂平板后挑取单菌落，那么就获得了一个纯的微生物群体。

明白否？

划线通过一系列交替或者连续的划线，将接种针上的菌再培养基上划开，这样可以保证有单独的菌来生长出一个单菌落。

单菌落你都不会挑么？板上长出单菌落后挑取到培养液中培养，获得的就是纯的一个系的微生物了。

还不明白？

平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环接种针的时候也会杀死一部分菌类。

稀释涂布平板法是稀释一组浓度梯度，在合适的稀释浓度可以确定菌类的密度，通过计算可以得知原液的浓度。因为长成的是一个真菌或者细菌分裂而来互不相接触的菌落 所以可以纯化。

把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞，用接种环在平板表面上作多次由点到线的划线稀释而获得较多独立分布的单个细胞，并让其成长为单菌落的方法。通过反复划线分离，可获得微生物的纯种。

扩展资料：

因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的微生物悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落。

大多数细菌和真菌，用平板法分离通常是满意的，因为它们的大多数种类在固体培养基上长得很好。并不是所有的微生物都能在固体培养基上生长，例如一些细胞大的细菌、许多原生动物和藻类等，这些微生物仍需要用液体培养基分离来获得纯培养。

参考资料来源：百度百科--划线平板

参考资料来源：百度百科--涂布平板法

1．样品稀释液的制备 准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液。

用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。

2．平板接种培养 平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。

（1）混合平板培养法 将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液各1ml放入编号10-9的3个平板中，同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3个平板中，再吸取10-7稀释液各lml放入编号10-7的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。

（2）涂抹平板计数法 涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取01ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设三个重复）。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。

显微镜计数法即血球计数法，事先把菌液稀释到一定的倍数，然后通过血球计数板在显微镜下计数。此法计数比较精准。活菌计数法是将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取02ml放入无菌平皿，再倒入适量的已熔化并冷至45℃左右的培养基，与菌液混匀，冷却、待凝固后，放入适宜温度的培养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式计算出原菌液的含菌数：每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数×稀释倍数×5稀释涂布平板法是一种粗略的活菌计数法，即通过一定的稀释倍数，涂布到平板上，在适宜的条件下培养后，观察活菌数。平板划线法是用来分离单菌落的一种方法，不是计数的方法。

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