配制培养基的步骤？

1、配制溶液

向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。

配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。

2、调节pH值 

用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。

3、过滤

用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。

4、分装

已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。

分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。

装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。

5、加棉塞 

分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。

制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。

棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。

6、制作斜面培养基和平板培养基

培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。

(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。

(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。

铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基未长杂菌，即可用来培养微生物。

参考资料来源：百度百科—培养基

（1）配制母液。把培养基m的必需元素按原配方量的50倍/100倍或1000倍称量后制成一种浓溶液，这种浓溶液叫母液在配制培养基时按比例分别量取母液稀释到所需的浓度即可母液配好后贴上标签，放在0～4℃的冰箱中可使用半年到1年，这样傲可节省许多时间可能产生化学反应的或溶解后产生沉淀的不能放在同一个容器m配制母液要用重蒸馏水药物要使用分析纯或等级较高的化学纯药物的称量和药液的定容都要准确。

母液①：硫酸镁18.5克．硝酸铵82.5克．硝酸钾95.0克；加水定容到1000毫升，浓度为培养基的50倍，配1升培养基时量取20毫升母液

母液②：氯化钙22.0克加水定容到500毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液

母液③：磷酸二氢钾8.5克加水定容到500毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液。

母液④；乙二胺四乙酸二钠3.73克硫酸亚铁2.78克，加水定容到1000毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液

母液⑤：硼酸620毫克，硫酸锰2230毫克，硫酸锌860毫克，硫酸铜2.5毫克，碘化钾83毫克，钼酸钠25毫克，氯化钴2.5毫克，加水定容到1000毫升，浓度为培养基的100信，配1升培养基时量取10毫升母液。

母液⑥：肌醇5克，甘氨酸100毫克，烟酸25毫克，盐酸吡哆醇25毫克，盐酸硫胺素5毫克，加水定容到500毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液

（2）配制培养基。配制每1000毫升培养基．称取6～10克琼：脂作凝固剂，具体按配方要求称量，放在水浴锅上慢慢溶解，先在量筒内放入一定量的水，按照母液顺序和规定量，量取母液，当母液加完后，根据需要每升培养基再加入生长调节物质如吲哚乙酸或萘乙酸等，细胞分裂素类0.04～10毫克，细胞分裂素应用最多的是6-苄基腺嘌呤，加完后倒入已熔化的琼脂中，每1000毫升培养基加入蔗糖30克或根据要求确定，定容到所需的体积，继续加温，直到琼脂完全熔解，用盐酸或氢氧化钠对培养基的pH进行调节，多数培养基的pH在5．4～6.0，MS培养基的pH为5.7。

将配好的培养基趁热倒入培养容器中，培养基占容器体积的1／4～1／3不要将培养基沾到容器壁上，否则容易被杂菌感染，然后及时加盖，进行高压灭菌，灭菌时要按高压灭菌锅的操作规程使用．在121℃、压力111千帕下维持15～20分钟，温度和时间都要严格控制，到时间后立即切断电源，当高压锅内压力降到常压后，开启放气阀，打开锅盖，取出灭菌好的培养基，放在接种室中培养3天，没被感染后才能用来组织培养

培养基的配制：配制培养基时通常以1升为一个容量单位，先在量筒内放少量50摄氏度左右的蒸馏水，再按配方中所列顺序逐个投药，待一种药剂溶化后再放另一种药剂，药剂全部溶化后，根据需要再加入一定量的生长调节物质，补充蒸馏水至1升，最后加入加热熔化好的琼脂。这时将配好的培养基再用1摩尔的NaOH调整pH（1摩尔的NaOH的配制方法是：称取40克NaOH溶于1升蒸馏水中，混匀即可）。

调整时用酸度计或精密试纸测定，使之达到培养基的酸碱度要求（一般保持pH5.4～5.8较好）。调好酸碱度后趁热分装试管或三角瓶中，盖好棉塞，做上标记。待琼脂冷凝后再用牛皮纸包扎，然后放入高压锅中灭菌，压力为1.2千克/平方厘米，保持20分钟即可。冷却后可放培养室预培养3天，没有杂菌污染则可取花卉材料进行接种。要注意，培养基配好后应立即进行高压灭菌，以防腐败变质。

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