培养细菌真菌的方法分四步

培养细菌真菌的方法分四步：高温灭菌；冷却；接种；恒温培养。

1.首先要配制含有营养物质的培养基，可以用牛肉汁加琼脂熬制。

2.然后把培养基和所有用具进行高温灭菌，以防杂菌对实验的干扰。

3.为防止高温杀死细菌、真菌，要等冷却后，在进行接种。

4.接种后放在温暖的地方进行恒温培养。

注意：定期观察并详细记录实验现象。

故细菌、真菌培养的一般方法：配置培养基一高温灭菌一接种一培养。

常见真菌培养基有：

配方一 萨市（Sabouraud’s）培养基

蛋白胨10克琼脂20克

麦芽糖40克 水 1000毫升

先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。

本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。

配方二 马铃薯糖琼脂培养基

把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入10克琼脂，煮沸溶解后加糖20克（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装，灭菌，备用。

把这培养基的pH值调到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。

配方三 黄豆芽汁培养基

黄豆芽 100克 琼脂 15克

葡萄糖20克 水 1000毫升

洗净黄豆芽，加水煮沸30分钟。用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到1000毫升，分装，灭菌，备用。

把这培养基的pH值调到7.2～7.4，可用来培养细菌和放线菌。

配方四 豌豆琼脂培养基

豌豆 80粒 琼脂 5克

水 200毫升

取80粒干豌豆加水，煮沸1小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮沸到溶解，分装，灭菌，备用。

第一，养殖食用菌所需的时间比较长，一般需要40～50d，为此，教师要做好时间安排，充分利用课余时间以及机动课等组织学生开展活动。条件比较好的学校，养殖活动的场所可以设在校内，以便集中开展活动；条件较差的学校，可以让学生在家中进行养殖，但培养菌丝时最好在校内集中进行，以利于控制环境条件。 第二，种类的选择。最好选用当地常见的、易于培养的食用菌进行养殖，以提高实践活动的成功率和学生的学习兴趣。从食用的普遍性和易于培养的角度看，养殖凤尾菇或金针菇比较好。尽管如此，养殖食用菌难度仍然比较大，所以，最好到食用菌养殖基地购买菌种，以确保养殖活动成功。 第三，准备工作。（1）养殖食用菌所需的材料用具应当就地取材。农村学校可以利用棉子皮、稻草、麦麸等做培养料，城市学校可以利用锯木屑等做培养料。教师还可以发动学生寻找或利用家中废弃的塑料袋、玻璃罐头瓶、透光的饮料瓶等做培养用具。容器一般以体积为500～700mL、瓶口直径不小于6cm为宜。（2）可以采用高温高压灭菌的方法对实验用具进行消毒。如果实验用具较多，最好用质量分数为0.25%的高锰酸钾溶液灭菌消毒，这种方法最为简单、经济。高锰酸钾具有一定的腐蚀性，学生在接触高锰酸钾时应戴手套。如果用木屑配制培养料，最好选用硬杂木的木屑。松木屑中的芳香物质对食用菌的生长有抑制作用。如果用松的木屑，需要用高压灭菌锅加热3h，以便除去其中的芳香物质。 第四，发菌阶段（1）可以采用分层接种法，具体操作见食用菌养殖。接种时菌种量越大，培养袋中长满菌丝所需的时间就越短。一般接种的菌种量是培养料量的5%～25%。条件适合的情况下，培养袋中长满菌丝一般约需3～4周的时间。菌丝的分解代谢是需要氧气的，所以接种时袋口与培养料和菌种之间应留有2～3cm的空间。待菌丝生长到一定程度后，菌丝的生长速度就会明显减缓。这时可以用消过毒的解剖针在培养袋上扎几个小孔，目的是增加通气量，但是，小孔不要扎得太深，以免造成污染。（2）在发菌（菌丝的培养）过程中，可以通过定期喷洒清水的方法使周围空气的相对湿度保持在70%～80%。特别是培养袋上扎孔后，更应保持周围空气的相对湿度，以免培养料失水变干。注意，不要直接向培养袋上喷水，以免使其表面凝集水滴，造成污染。学生要定期观察菌丝的生长情况，并及时做好记录。当发现有的培养袋（瓶）被严重污染时，要及时将它们清除出去。如果污染不严重且易于挖除，可以用消毒用具及时将污染的部分挖除，并在挖除的地方撒上石灰，继续培养。（3）出菇（子实体的培养）时为了使蘑菇长得整齐，可以进行搔菌（即剔除培养料面上的老菌丝）。搔菌的具体方法是：在菌丝长满培养袋（原基即将形成或刚刚形成）时，用消过毒的小勺（或小铲）把原先接上去的菌种及培养料表面上的老菌丝除去，然后继续进行培养。在出菇的过程中，最好让学生每天观察一次子实体的生长情况，并注意保持子实体生长所需的环境条件，以免子实体和培养料失水变干。（4）在养殖活动开始前，教师要指导学生做好养殖计划，包括设计各自的观察记录表。养殖过程中，教师可以安排学生轮流进行观察，如实做好观察记录（如当天的气温等天气情况、菌丝和子实体的生长情况及形态特点等）。养殖活动结束后，教师还要组织好各小组汇报总结工作，引导学生讨论并归纳该种食用菌的生长过程、适宜条件，代谢类型等，及时填写活动报告，并总结养殖食用菌的成功经验和失败教训等。

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