hiv病毒在人体内逆转录过程


HIV病毒的复制过程包括病毒的吸附与穿入、基因复制与蛋白质合成、病毒体装配与释放。复制:HIV核心进入感染细胞不久,即可在反转录酶作用下以病毒RNA为模板反转录形成互补负链DNA,RNase负责降解RNA-DNA杂交体中的RNA部分,然后在DNA聚合酶作用下以负链DNA为模板复制形成双链DNA,反转录的直接产物始末缎带LTRs的DNA双链。该双链线状DNA进入细胞核,在病毒整合酶作用下促进双n链DNA与宿主细胞基因组整合,病毒基因组成为宿主基因的一部分,随宿主细胞DNA复制而复制,并随宿主细胞的分裂进入子代细胞。

反转录与逆转录的唯一区别后者是生物的自然发生的过程,前者是人工进行的过程。但是它们的本质是一样的。

逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现,是对中心法则的重要修正和补充。

转录能被一些特异性的抑制剂抑制,有些抑制剂是治疗某些疾病的药物,有的则是研究转录机理的重要试剂。

一类抑制剂同时抑制DNA复制,例如:放线菌素D、纺锤菌素、远霉素、溴乙锭和黄曲霉素等。第二类抑制剂作用于RNA聚合酶,使RNA聚合酶的活性改变或丧失,从而抑制转录的进行。这类抑制剂只抑制转录,不影响复制,是研究转录机制和RNA聚合酶性质的重要工具,例如:利福平等。

扩展资料

逆转录的发现有重要的理论意义和实践意义。

(1)对分子生物学的中心法则进行了修正和补充。

(2)在致癌病毒的研究中发现了癌基因,癌基因的发现为肿瘤发病机理的研究提供了很有前途的线索。

(3)在实际工作中有助于基因工程的实施。由于目的基因的转录产物易于制备,可将mRNA反向转录形成DNA用以获得目的基因。

参考资料来源:百度百科-逆转录

百度百科-反转录

一般动植物都只有复制,翻译和转录三种,逆转录是部分病毒才有的。复制指的是DNA和RNA的解旋复制,转录是指通过碱基互补的原则来生成一条带有互补碱基的MRNA,通过它携有的密码子到核糖体中可以实现蛋白质的合成,而翻译就是依靠TRNA也按照碱基互补的翻译原则来翻译MRNA上的密码子,从而形成蛋白质。

AIDS的病原体HIV(人类免疫缺陷病毒)借助其薄膜蛋白刺突gp120与易感细胞表面CD4结合并进一步介导包膜与宿主细胞膜的融合,核衣壳进入细胞,与细胞质内脱壳释放出RNA。在病毒逆转录酶和病毒体相关DNA多聚酶的作用下,病毒RNA首先反转录成cDNA(负链DNA),构成RNA-DNA中间体。中间体中的RNA再经过RNA酶H水解,而以剩下的负链DNA复制成双股DNA(前病毒DNA)。逆转录过程导致线性DNA分子进入细胞核并在病毒插入酶的催化下插入宿主DNA,成为细胞染色体的一部分。宿主细胞染色体上的病毒基因,称作前病毒(provirus),与受感染细胞基因组一起复制。

当前病毒活化而自身转录时,LTR起着启动和增强其转录的作用。在宿主RNA聚合酶的作用下,病毒DNA转录为RNA并分别经过拼接,加冒或者加尾形成HIV的mRNA或子代病毒RNA。mRNA在宿主细胞核糖体上翻译蛋白质,经过进一步酶解和修饰等形成病毒结构蛋白或调节蛋白;子代RNA则与病毒源结构蛋白装配成核衣壳,从宿主细胞释放出时获得包膜,形成具有感染性的子代病毒。

HIV仅感染具有表面分子CD4的T细胞和巨噬细胞。

不是,只有逆转录病毒侵染细胞时才有逆转录过程。

逆转录(reverse

transcription)是以RNA为模板合成DNA的过程,即RNA指导下的DNA合成。是 RNA病毒的复制形式,需 逆转录酶的催化。艾滋病病毒(HIV)就是一种典型的 逆转录病毒。

更正一下tchxb的答案:

先转出与RNA互补的DNA单链,后转出双链DNA

RNA首先反转录成cDNA(负链DNA),构成RNA-DNA中间体中间体中的RNA再经过RNA酶H水解,而以剩下的负链DNA复制成双股DNA

tchxb的答案基本上是对的

逆转录过程需要的酶是

ADNA指导的DNA聚合酶

B核酸酶

CRNA指导的RNA聚合酶

DDNA指导的RNA聚合酶

E逆转录酶

正确答案:

内容目录:

RT-qPCR简介

RT-qPCR逆转录过程

RT-qPCR 的 qPCR 过程

定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR, RT-qPCR)是应用于以RNA作为起始材料的PCR实验中的一种实验方法。在该方法中,总RNA或信使RNA(mRNA)首先通过逆转录酶转录成互补DNA(cDNA)。随后,以cDNA为模板进行qPCR反应。RT-qPCR已被用于多种分子生物学的应用中,其中包括基因表达分析、RNA干扰验证、微阵列验证、病原体检测、基因测试和疾病研究。

RT-qPCR可通过一步法或两步法来完成(图1、表1)。一步法RT-qPCR把逆转录与PCR扩增结合在一起,使逆转录酶与DNA聚合酶在同一管内同样缓冲液条件下完成反应。一步法RT-qPCR只需要利用序列特异性引物。在两步法RT-qPCR中,逆转录和PCR扩增过程是在两个管中完成,使用不同的优化的缓冲液、反应条件、以及引物设计策略。

在设计RT-qPCR实验过程中,决定是否要使用总RNA或纯化的mRNA作为模板进行逆转录十分重要。尽管mRNA可能能够提供略高的灵敏度,但总RNA仍经常使用。其原因是总RNA作为起始材料具有较mRNA更重要的优势。首先,其过程需要较少的纯化步骤,这确保了更好的定量回收模板和更好的把结果标准化为起始的细胞数。其次,其避免了mRNA富集步骤,这能够避免由于不同mRNA的回收率不同而带来的结果偏移的可能性。总的来说,由于在大多数的应用中,目标基因的相对定量比检测的绝对灵敏度更为重要,因此在大多数情况下,总RNA更适用1。

在两步法中,有三种不同的方法可用于引发cDNA反应:oligo(dT) 引物、随机引物、或序列特异性引物(图2,表2)。通常情况下,是将 oligo(dT) 引物和随机引物进行混合使用。这些引物退火至模板 mRNA 链,并提供给逆转录酶一个用于合成的起点位置。

逆转录酶是利用 RNA 合成 DNA 的一种酶。一部分逆转录酶具有 RNA 酶活性,能够在转录后降解 RNA-DNA 杂交链中的 RNA 链。如果其不具有 Rnase 酶活性,可加入 RNaseH 以获得更高的 qPCR 效率。常用的酶包括莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV)和禽成髓细胞瘤病毒逆转录酶(AMV)。对于 RT-qPCR 来说,理想的情况下是选择具有较高热稳定性的逆转录酶,这样 cDNA 的合成能够在较高的温度下进行,确保成功转录具有较高二级结构的 RNA,同时保持其在整个反应过程中的全部活性,从而得到更高的 cDNA 产量。

RNase H 能够从 RNA-DNA 双链中降解 RNA 链,从而允许双链 DNA 的有效合成。然而,当使用长 mRNA 作为模板,RNA 可能被过早的降解,从而导致截短的 cDNA。因此,在 cDNA 克隆过程中,如果需要合成长的转录物时,尽量减小 RNase H 的活性通常是有益的。与此相反,拥有 RNase H 活性的逆转录酶通常有利于 qPCR 的应用,因为它们能够在 PCR 的第一个循环中提高 RNA-DNA 双链的熔解(图3)。

用于 RT-qPCR 中 qPCR 步骤的 PCR 引物最好应设计成跨越一个外显子-外显子连接,其中一条扩增引物可以潜在地跨越实际外显子-内含子边界(图4)。由于含内含子的基因组 DNA 序列不会被扩增,因此这种设计可以减少从污染的基因组DNA中扩增得到的假阳性的风险。

如果引物不能被设计成能够分离外显子或外显子-外显子边界,则有必要利用无 RNA 酶的 DNA 酶I或 dsDNA 酶处理 RNA 样品以除去基因组 DNA 污染。

一个逆转录阴性对照(-RT对照)应该包括在所有的 RT-qPCR 的实验中,以检测 DNA 污染(如基因组 DNA 或来自之前反应的 PCR 产物)。这一对照包含除逆转录酶之外的所有反应组分。由于该对照不会发生逆转录,因此如果观察到 PCR 扩增,则极有可能来自 DNA 的污染。

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