猫头鹰主要以老鼠为食，也吃昆虫、鸟、蜥蜴、鱼等动物。少数小猫头鹰，如有纵条纹的猫头鹰和猫头鹰，也大量捕食昆虫。所以猫头鹰也有助于消灭害虫。
猫头鹰具有消化能力，所以常常将食物整个吞下，将食物中难以消化的骨头、羽毛、毛发、甲壳素等残渣整合成块状，形成小块，通过食道和口腔吐出，称为食丸，也叫唾余。
