为什么pcr产物可以直接连t载体

普通的taq聚合酶会在PCR反应过程中在3’末端加入一个碱基A，线性化平末端T载体的两端分别又人工加上一个额外的T碱基，从而可与PCR克隆产物的A末端互补配对，提高了PCR产物连接和克隆的效率。

分析原因可能有：

1、T载体连接有问题，重新调整目的片段和T载体的比例，重新连接。

2、PCR某种试剂出问题了，以前有个师姐就是这样，怎么也扩不出来，让别人带样扩出来了，原来是Taq 酶出问题了，你也可以确定一下。

T载体可以克隆任何DNA片段。

它的目的是后续测序，以便连接到表达载体表达蛋白，所以多数情况下用cDNA。

但是也可以基因组测序分析用，扩增16SrRNA就是基因组扩增后T载体克隆测序。。

pMD®19-T Vector是线性的，必须是3'段有A的目的基因片段才可以和pMD®19-T Vector连接。

另外pMD®19-T simple是指消除了pUC19载体上的多克隆酶切位点，由于本载体上消除了多克隆酶切位点，克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时，酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响，可以大大提高酶切效率，增加亚克隆成功率。

而pMD®19-T Vector上面还有多克隆位点的存在，其多克隆位点跟pUC19的一样

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