原代培养一般培养到多少代了解原代培养一般能培养到多少代

旖旎的意思2023-05-07  29

1、一般传至10代左右。

2、原代培养的细胞一般传至10代左右就不易传下去了,细胞的生长就会出现停滞,大部分细胞衰老死亡。

3、但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去,这些存活的细胞一般能够传到40~50代,这种传代细胞叫做细胞株。细胞株的遗传物质没有发生改变,在培养过程中其特征始终保持。

4、当细胞株传至50代以后又会出现“危机”,不能再传下去。但是有部分细胞的遗传物质发生了改变,并且带有癌变的特点,有可能在培养条件下无限制地传代下去,这种传代细胞称为细胞系。

初代培养 原理

将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。

仪器、材料及试剂

仪器:培养箱(调整至37℃),培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃)

材料:动物组织块

试剂:1640培养基(含20%小牛血清),025%胰酶,Hank′s液,碘酒

初代消化培养法

1 准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2 布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。

3 处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。

4 剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。

5 消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。

6 分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。

7 计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在72~74范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。

8 培养:置于365℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需要换新塞。

初代组织块培养法

1 剪切:把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,吸静Hanks液,用眼科剪反复剪切1mm3块为止。

2 摆布:用弯头吸管吸取若干小块,置于培养瓶中,用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部,小块相互距离以05cm为宜,每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。

3 轻轻翻转培养瓶,另瓶底向上,注意翻瓶时勿另组织小块流动,塞好瓶塞,置365℃温箱培养2小时左右(勿超过4小时),使小块微干涸。

4 培养:从微箱中取出培养瓶,开塞,46度斜持培养瓶,箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许,然后缓缓再把培养瓶翻转过来,让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。

传代培养法

原理

细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时

也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

材料和试剂

1 细胞:贴壁细胞株

2 试剂:025%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清)

3 仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等

操作步骤

1 吸除培养瓶内旧培养液。

2 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许,以能覆满瓶底为限。

3 置温箱中2~5分钟,当发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,立即终止消化。

4 吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉流失,如用胰蛋白酶液单独消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液冲洗,直接加入培养液。

5 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。

6 计数板计数后,把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中,置温箱中培养。

无菌操作注意事项

1 操作前要洗手,进入超净台后手要用75%酒精或02%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。

2 点燃酒精灯,操作在火焰附近进行,耐热物品要经常在火焰上烧灼,金属器械烧灼时间不能太长,以免退火,并冷却后才能夹取组织,吸取过营养液的用具不能再烧灼,以免烧焦形成碳膜。

3 操作动作要准确敏捷,但又不能太快,以防空气流动,增加污染机会。

4 不能用手触已消毒器皿的工作部分,工作台面上用品要布局合理。

5 瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。

6 吸溶液的吸管等不能混用。

初代培养 原理

将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。

仪器、材料及试剂

仪器:培养箱(调整至37℃),培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃)

材料:动物组织块

试剂:1640培养基(含20%小牛血清),025%胰酶,Hank′s液,碘酒

初代消化培养法

1 准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2 布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。

3 处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。

4 剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。

5 消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。

6 分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。

7 计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在72~74范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。

8 培养:置于365℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需要换新塞。

初代组织块培养法

1 剪切:把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,吸静Hanks液,用眼科剪反复剪切1mm3块为止。

2 摆布:用弯头吸管吸取若干小块,置于培养瓶中,用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部,小块相互距离以05cm为宜,每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。

3 轻轻翻转培养瓶,另瓶底向上,注意翻瓶时勿另组织小块流动,塞好瓶塞,置365℃温箱培养2小时左右(勿超过4小时),使小块微干涸。

4 培养:从微箱中取出培养瓶,开塞,46度斜持培养瓶,箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许,然后缓缓再把培养瓶翻转过来,让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。

传代培养法

原理

细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时

也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

材料和试剂

1 细胞:贴壁细胞株

2 试剂:025%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清)

3 仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等

操作步骤

1 吸除培养瓶内旧培养液。

2 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许,以能覆满瓶底为限。

3 置温箱中2~5分钟,当发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,立即终止消化。

4 吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉流失,如用胰蛋白酶液单独消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液冲洗,直接加入培养液。

5 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。

6 计数板计数后,把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中,置温箱中培养。

无菌操作注意事项

1 操作前要洗手,进入超净台后手要用75%酒精或02%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。

2 点燃酒精灯,操作在火焰附近进行,耐热物品要经常在火焰上烧灼,金属器械烧灼时间不能太长,以免退火,并冷却后才能夹取组织,吸取过营养液的用具不能再烧灼,以免烧焦形成碳膜。

3 操作动作要准确敏捷,但又不能太快,以防空气流动,增加污染机会。

4 不能用手触已消毒器皿的工作部分,工作台面上用品要布局合理。

5 瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。

6 吸溶液的吸管等不能混用。

初代培养 原理

将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。

仪器、材料及试剂

仪器:培养箱(调整至37℃),培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃)

材料:动物组织块

试剂:1640培养基(含20%小牛血清),025%胰酶,Hank′s液,碘酒

初代消化培养法

1 准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2 布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。

3 处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。

4 剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。

5 消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。

6 分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。

7 计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在72~74范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。

8 培养:置于365℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需要换新塞。

初代组织块培养法

1 剪切:把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,吸静Hanks液,用眼科剪反复剪切1mm3块为止。

2 摆布:用弯头吸管吸取若干小块,置于培养瓶中,用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部,小块相互距离以05cm为宜,每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。

3 轻轻翻转培养瓶,另瓶底向上,注意翻瓶时勿另组织小块流动,塞好瓶塞,置365℃温箱培养2小时左右(勿超过4小时),使小块微干涸。

4 培养:从微箱中取出培养瓶,开塞,46度斜持培养瓶,箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许,然后缓缓再把培养瓶翻转过来,让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。

传代培养法

原理

细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时

也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

材料和试剂

1 细胞:贴壁细胞株

2 试剂:025%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清)

3 仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等

操作步骤

1 吸除培养瓶内旧培养液。

2 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许,以能覆满瓶底为限。

3 置温箱中2~5分钟,当发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,立即终止消化。

4 吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉流失,如用胰蛋白酶液单独消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液冲洗,直接加入培养液。

5 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。

6 计数板计数后,把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中,置温箱中培养。

无菌操作注意事项

1 操作前要洗手,进入超净台后手要用75%酒精或02%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。

2 点燃酒精灯,操作在火焰附近进行,耐热物品要经常在火焰上烧灼,金属器械烧灼时间不能太长,以免退火,并冷却后才能夹取组织,吸取过营养液的用具不能再烧灼,以免烧焦形成碳膜。

3 操作动作要准确敏捷,但又不能太快,以防空气流动,增加污染机会。

4 不能用手触已消毒器皿的工作部分,工作台面上用品要布局合理。

5 瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。

6 吸溶液的吸管等不能混用。

初代培养 原理

将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。

仪器、材料及试剂

仪器:培养箱(调整至37℃),培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃)

材料:动物组织块

试剂:1640培养基(含20%小牛血清),025%胰酶,Hank′s液,碘酒

初代消化培养法

1 准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2 布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。

3 处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。

4 剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。

5 消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。

6 分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞

团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。

7 计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在72~74范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。

8 培养:置于365℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需要换新塞。

初代组织块培养法

1 剪切:把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,吸静Hanks液,用眼科剪反复剪切1mm3块为止。

2 摆布:用弯头吸管吸取若干小块,置于培养瓶中,用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部,小块相互距离以05cm为宜,每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。

3 轻轻翻转培养瓶,另瓶底向上,注意翻瓶时勿另组织小块流动,塞好瓶塞,置365℃温箱培养2小时左右(勿超过4小时),使小块微干涸。

4 培养:从微箱中取出培养瓶,开塞,46度斜持培养瓶,箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许,然后缓缓再把培养瓶翻转过来,让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。

传代培养法

原理

细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时

也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

材料和试剂

1 细胞:贴壁细胞株

2 试剂:025%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清)

3 仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等

操作步骤

1 吸除培养瓶内旧培养液。

2 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许,以能覆满瓶底为限。

3 置温箱中2~5分钟,当发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,立即终止消化。

4 吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉流失,如用胰蛋白酶液单独消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液冲洗,直接加入培养液。

5 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。

6 计数板计数后,把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中,置温箱中培养。

无菌操作注意事项

1 操作前要洗手,进入超净台后手要用75%酒精或02%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。

2 点燃酒精灯,操作在火焰附近进行,耐热物品要经常在火焰上烧灼,金属器械烧灼时间不能太长,以免退火,并冷却后才能夹取组织,吸取过营养液的用具不能再烧灼,以免烧焦形成碳膜。

3 操作动作要准确敏捷,但又不能太快,以防空气流动,增加污染机会。

4 不能用手触已消毒器皿的工作部分,工作台面上用品要布局合理。

5 瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。

6 吸溶液的吸管等不能混用。

原代培养 通过组织块直接长出单层细胞或用酶或机械方法将组织分散成单个细胞开始培养,在首次传代前的培养可认为是原代培养。原代培养最大的优点是,组织和细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大变化,在一定程度上能反映体内状态。特别是在细胞培养会合时,原代培养的某些特殊功能表达尤为强烈。在这样的培养阶段能更好地显示与亲体组织紧密结合的形态学特征。在供体来源充分、生物学条件稳定的情况下,采用原代培养做各种实验,如药物测试、细胞分化等,效果很好。但应注意,原代培养组织是由多种细胞成分组成的,比较复杂。即使全为同一类型的细胞,如上皮细胞或成纤维细胞,也仍具有异质性,在分析细胞生物学特性时比较困难。其次,由于供体的个体差异及其他一些原因,细胞群生长效果有时也不一致。

原代培养也是建立各种细胞系(株)必经的阶段。假如原代培养能够维持几小时甚至更长,即可进行进一步筛选。有的细胞具有继续增殖能力,有的细胞类型只是存活而不增殖,而另外一些细胞只是在特殊条件下应用而不存活,因而细胞类型的分布将会改变。在单层培养的情况下,瓶底全部铺满细胞,达到会合以后,对密度有依赖性的细胞则逐渐减少生长,而失去密度依赖敏感性的细胞则生长增加,天然或自发转化的细胞则过度生长。借助于频繁传代,保持细胞低密度生长,有利于保存细胞的正常表型(如小鼠成纤维细胞)。而自发转化则倾向于高细胞密度的过度生长。

传代培养 原代培养形成的单层细胞汇合以后,需要进行分离培养,否则细胞会因生成空间不足或由于细胞密度过大引起营养枯竭,都将影响细胞的生长,这一程序常称为传代或传代培养。原代培养在首次传代时即为细胞系,能连续培养下去的为连续细胞系;不能连续培养的为有限细胞系。通常,传代培养是指扩大培养,也就是将一份细胞一分为二或者一分为三进行培养等。但严格说来,不论稀释与否,将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代或传代培养。可以理解,在任何时候,细胞从一个瓶子接种到另一个瓶子时总会丢失一部分,因此,在客观上细胞必定有所稀释。

传代代数这一概念常常容易同“增殖代数”相混淆。细胞“一代”一词仅指从细胞接种到分离再培养时的一段时间。如某一细胞系为第153代,即指该细胞系已传代153次。它与细胞“增殖代数”(细胞世代或倍增)不同,在细胞一代中,细胞约能倍增3~6次。由此可见,细胞代数与增殖代数相关,确切的代数则依赖于细胞株和培养条件的不同而异。但构成一个细胞系的生长条件必须是同样的,因而细胞系应该表达近似的增殖代数或倍增代数。

原代培养物经首次传代成功后即为细胞系(cell line), 由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代,或传代次数有限, 可称为有限细胞系(finite cell line), 如可以连续培养, 则称为连续细胞系(continuous cell line), 培养50代以上并无限培养下去。

从一个经过生物学鉴定的细胞系由单细胞分离培养或通过筛选的方法由单细胞增殖形成的细胞群称细胞株(cell strain)。所以细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞。从培养代数来讲,可培养到40-50代。

传代培养的细胞是细胞系 中学就到这个地步吧

细胞株 就是从细胞系筛选出来的 有特殊属性的 比如无线增值的

一、体外培养细胞的种类和命名

体外培养细胞的名称,随培养细胞技术的发展和细胞种类的增多而演变。最早采用的名称为细胞株(Cell strain),以后又出现细胞系(Cell Line)一词,两者曾一度混用致概念不明确,导致文献中也很混乱。我国也曾有类似情况,在我国尚未制定出统一名词前,本书用的名词基本参考Schaeffer,WI(1979)和国内有关会议、以及国内外杂志常用名词为准。

(一)初代培养

初代培养又称原代培养,即直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。一旦已进行传代培养(Subculture)的细胞,便不再称为初代培养,而改称为细胞系。

(二)细胞系

初代培养物开始第一次传代培养后的细胞,即称之为细胞系。如细胞系的生存期有限,则称之为有限细胞系(Finite Cell Line);已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系,称连续细胞系或无限细胞系(Infinite Cell Line)。无限细胞系大多已发生异倍化,具异倍体核型,有的可能已成为恶性细胞,因此本质上已是发生转化的细胞系。无限细胞系有的只有永生性(或不死性),但仍保留接触抑制和无异体接种致癌性;有的不仅有永生性,异体接种也有致瘤性,说明已恶性化。这两种不同性质的无限细胞系,在国内外文献中对这些名词的应用上也常不十分严格。为概念上的明确,对有恶性的无限细胞系采用“恶性转化细胞系”一词表示可能更妥。而对那些只具永生性而无恶性的细胞系,则用无限细胞系或转化细胞系即可。当前流传的NIH3T3、Rat-1、10T1/2等均属这类细胞系。

由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系不同的细胞系,称该细胞系的亚系(Subline)。

(三)克隆细胞株

从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群,称细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原株性状不同的细胞群,亦可称之为亚株

希望这些对你有帮助!

将细胞分散使其解除接触抑制保证其营养成分快速的转运。在原代细胞培养离心的介绍中,其的目的是将细胞分散使其解除接触抑制保证其营养成分快速的转运,离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层,这样可根据需要收获目的细胞,原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究。

1.取出生后1-3天内的大鼠脑组织后,先仔细剥除脑膜和血管等纤维成分,置入Hanks液中漂洗1~2次后,置于30~50倍的Hanks液中,脑组织比较柔软,反复吹打即可制成细胞悬液。

2.为排除脂肪成分和其它碎块,把悬液注入离心管中,在室温直立5~10分钟后,细胞或细胞团块自然下沉,脂肪等杂物易漂浮于悬液表层,吸除上清,如此反复二三次可获得较多的细胞成分。

3.向末次沉淀物中加入适量营养液,通过纱网或纱布滤过,计数细胞并调整好细胞密度,接种入培养瓶或皿中,置5%CO2温箱中培养。

4.细胞生长汇合后,可用025%胰蛋白酶消化法做传代处理,加消化液的量以能覆盖细胞层即可,待细胞开始从瓶壁脱离(平均5~10分钟),加入含有血清培养液,吹打制成细胞悬液。生物帮上面有这方面的介绍,

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1 原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此,较为严格地说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质,如果是正常细胞,仍然保留二倍体数。但实际上,通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。最常用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。

2一般持续1一4周。此期细胞呈活跃的移动,可见细胞分裂,但不旺盛。初代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。

1、一般传至 10 代左右。

2、原代培养的细胞一般传至10代左右就不易传下去了,细胞的生长就会出现停滞,大部分细胞衰老死亡。

3、但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去,这些存活的细胞一般能够传到40~50代,这种传代细胞叫做细胞株。细胞株的遗传物质没有发生改变,在培养过程中其特征始终保持。

4、当细胞株传至50代以后又会出现“危机”,不能再传下去。但是有部分细胞的遗传物质发生了改变,并且带有癌变的特点,有可能在培养条件下无限制地传代下去,这种传代细胞称为细胞系。

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