大巴车凌晨2点至5点在高速上必须休息。根据《道路旅客运输企业安全管理规范》：长途客运车辆凌晨2时至5时停止运行或实行接驳运输，凌晨2点后禁止长途客车从收费站口上高速，对此时间段内正在高速公路上行驶的长途客车就近引导到服务区或客运站停车休息。从事线路固定的机场、高铁快线以及短途驳载且单程运营里程在100公里以内的客运车辆，在确保安全的前提下，不受凌晨2时至5时通行限制。
【法律依据】
《道路旅客运输企业安全管理规范》长途客运车辆凌晨2时至5时停止运行或实行接驳运输，凌晨2点后禁止长途客车从收费站口上高速，对此时间段内正在高速公路上行驶的长途客车就近引导到服务区或客运站停车休息。从事线路固定的机场、高铁快线以及短途驳载且单程运营里程在100公里以内的客运车辆，在确保安全的前提下，不受凌晨2时至5时通行限制。
驾驶长途客车，请注意停车休息。24小时累计驾驶时间不超过8小时，白天连续驾驶不超过4小时，夜间连续驾驶不超过2小时，每次停车休息时间不少于20分钟，驾驶客车请保持安全车速，夜间行驶要减速慢行，最高时速不超过白天正常限速的80%。
夜间行车注意事项
夜间道路上的交通流量小，行人和自行车的干扰也相对较少，驾驶员一般比较容易高速行车，因而很可能发生交通事故。
夜间行车由亮处到暗处时，眼睛有一个适应过程，因此必须降低车速，在驶经弯道、坡路、桥梁、窄路和不易看清的地方更应降低车速并随时做好制动或停车的准备；驶经繁华街道时，由于霓虹灯以及其他灯光的照射对驾驶员的视线有影响，这时也须低速行驶。
按相关规定长途客运车辆在凌晨2点到5点是禁止在高速上行驶的，这个时间段一定要记住，不然开车到高速路口就驾驶不上去了。
对小车等其它车辆目前并没有明确禁行上高速时间的相关政策，但禁止长途客运车辆在凌晨2点到5点在高速上行驶，主要是为了安全起见。这是因为在这个时间段已经到了深夜，属于夜间行车，司机们不免会有疲倦。在这段时间禁止大巴车上高速，可以防止因为疲劳驾驶导致交通事故，司机们也可以好好利用这个时间休息。
即使有明文规定了长途客运车辆在凌晨2点到5点禁止在高速上行驶，驾驶人们在平时的驾驶中也要注意休息，避免长时间驾驶。
广州到深圳最晚发车时间：20:40。一般坐席票价：55元。
广州到深圳：最快，从广州南坐高铁,只需35分钟寄到深圳北站。当然，还需要仔细衡量从市区到高铁站的时间.广州天河到广州南站约需要1小时,深圳北站到华强北也需要40分钟左右。次快，从广州东坐动车,约1小时04分到罗湖火车站,如果你是从广州天河出发,到深圳罗湖办事,是很靠谱的选择.票价比高铁贵6块钱左右.动车车次比高铁车次要多,约20分钟一趟车。最省钱，乘坐校际大巴只需30块钱。
广州，简称穗，别称羊城、花城，广州地处广东省中南部，珠江三角洲北缘，濒临南海，邻近香港、澳门，是中国通往世界的南大门，是粤港澳大湾区、泛珠江三角洲经济区的核心城市以及一带一路的枢纽城市。广州是国家历史文化名城，从秦朝开始，广州一直是郡治、州治、府治的行政中心；广州从3世纪30年代起成为海上丝绸之路的主港，唐宋时期成为中国第一大港，是世界著名的东方港市；明清两代成为中国唯一的对外贸易大港，是世界上唯一的2000多年长盛不衰的大港。
深圳，简称“深”，别称鹏城，古称南越、新安、宝安。是中国四大一线城市之一，广东省省辖市、计划单列市、副省级市、国家区域中心城市、超大城市。深圳是中国改革开放建立的第一个经济特区，是中国改革开放的窗口，已发展为有一定影响力的国际化城市，创造了举世瞩目的“深圳速度”，同时享有“设计之都”、“钢琴之城”、“创客之城”等美誉。深圳市域边界设有中国最多的出入境口岸。深圳也是重要的边境口岸城市，皇岗口岸实施24小时通关。
