百度给的定义要高深得多,复制下来
:分解果胶的一个多酶复合物,通常包括原果胶酶、果胶甲酯水解酶、果胶酸酶。通过它们的联合作用使果胶质得以完全分解。天然的果胶质在原果胶酶作用下,转化成水可溶性的果胶;果胶被果胶甲酯水解酶催化去掉甲酯基团,生成果胶酸;果胶酸经果胶酸水解酶类和果胶酸裂合酶类降解生成半乳糖醛酸。
[原理]果胶物质主要存在于植物初生壁和细胞中间,果胶物质是细胞壁的基质多糖。果胶包括两种酸性多糖(聚半乳糖醛酸、聚鼠李半乳糖醛酸)和三种中性多糖(阿拉伯聚糖、半乳聚糖、阿拉伯半乳聚糖)。果胶酶本质上是聚半乳糖醛酸水解酶,果胶酶水解果胶主要生成β-半乳糖醛酸,可用次碘酸钠法进行半乳醛酸的定量,从而测定果胶酶活力。
果胶酶活力单位定义]
1g(或1ml液体酶)酶粉,于50.0℃、pH3.5条件下,每分钟催化果胶水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量为一个活力单位。
1. 试剂和仪器
*本标准所使用所有的试剂若无任何说明,均为分析纯
1.1 醋酸
1.2 碘
1.3 碘花钾
1.4 浓硫酸
1.5 果胶(sigma公司)
1.6 硫代硫酸钠
1.7 碳酸钠
1.8 可溶性淀粉
1.9 水浴锅
1.10 碘量瓶
2. 试剂的制备
2.1 pH3.5的酸水
用醋酸将蒸馏水调至3.5
2.2 1%果胶溶液:
准确称取分析纯果胶1g,用酸水溶解煮沸,冷却后过滤,定至100ml。
2.20.1N碘液:
准确称取碘化钾5g,用蒸馏水溶解后,加入2.54g碘,溶解后定容至100ml。
2.30.025mol/L硫代硫酸钠:
准确称取6.2g硫代硫酸钠,加蒸馏水后定容至1L
2.40.5%可溶性淀粉指示剂:
准确称取可溶性淀粉0.5g放入沸水中消煮至透明。
2.51M碳酸钠溶液:
准确称取10.6g碳酸钠,定容于100ml的水中
2.62N硫酸:
吸10ml的浓硫酸倒入170ml的水中
2.7酶样的制备
准确称取1.000g固体酶或移取1ml液体酶样,定容至100ml,于50℃水浴浸取1小时,过滤,滤液为供试酶液。则该酶已经稀释100倍。
3. 程序
3.1 取1%果胶酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸馏水(PH3.5),在50℃水浴中保温反应1小时。
3.2 取出后加热煮沸2~3min,冷却后,补水至20ml。
3.3 取5ml反应液于100ml碘量瓶中,加1M碳酸钠溶液1ml,0.1N碘液5ml,摇匀,具塞,于室温暗处下放置20min。
3.4 取出后加2N硫酸2ml,立即用0.05N硫代硫酸钠溶液滴定至浅黄色,加1ml0.5%可溶性淀粉溶液,继续滴定至蓝色消失为止。
3.5 空白试验以煮沸失活的酶液或蒸馏水代替酶液进行滴定。
3.6 每个酶样最少做两个平行样。
4. 计算
4.1 将测得的各平行样求OD值的均值。
4.2 计算酶的活性单位依据以下公式
酶的活力= [(B-A)*N*0.5*175*20*n*1000]/[51*52*W*60 ]
单位: U/g(ml)
式中: A:样品滴定所消耗硫代硫酸钠的毫升数。
B:空白滴定所消耗硫代硫酸钠的毫升数。
N:硫代硫酸钠摩尔浓度。
0.5:1当量硫代硫酸钠相当于0.5当量半乳糖醛酸。
20:反应液总体积
51:酶液体积以1ml计
52:吸取反应液
n:稀释倍数
W:酶粉重量g或酶液体积ml