流式细胞仪原理

流式细胞仪原理,第1张

流式细胞仪的工作原理:

将经特异性荧光染料染色后的待测细胞放入样品管中,细胞在气体的压力下进入充满鞘液的流动室,在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱,通过激光器激发出散射光信号和荧光信号,由各自的激光检测器收集信号,再经光电倍增管(PMT)将信号放大,转变为电信号后由计算机系统进行分析.

流式细胞仪的检测范围:

细胞结构:细胞大小,细胞颗粒度,DNA含量与细胞周期,RNA含量,蛋白质含量等等;

细胞功能: 细胞表面/胞浆/核的特异性抗原,细胞活性,细胞内/外的细胞因子,激素结合位点, 细胞受体,钙离子浓度,线粒体膜电位,等等

我简单说一下:\x0d\x0a1.首先,机器吸取细胞混悬液,射入由鞘液(一般都是磷酸盐缓冲液)。由于鞘液的流速大,所以细胞混悬液通过轴流的形式在中央,一般是单个细胞排队的形式。\x0d\x0a\x0d\x0a2.然后细胞通过检测窗口。有激光束照射。一般细胞都经过荧光染色,被激光照射后,会有不同波长的激发光产生。机器设有检测器来探测激发光的强弱\x0d\x0a\x0d\x0a3.根据激发光的强弱,来判断细胞和染色物质的结合情况,从而得到要检测的结果(比如抗原量,DNA量,等等)

流式细胞仪是通过激光对通过激光束的颗粒进行计数。

当颗粒或者细胞通过激光束的时候,会对光线产生折射和反射。这个折射和反射的信号被探测器记录下来。每通过一个细胞,就会产生一个峰值,最后记录峰值的个数,就可以计数了


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