实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么?

实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么?,第1张

二者结果相同。都能说明生物体外的特殊DNA复制的整个过程的扩增效率和溶解温度情况。

区别:

1、二者系统组成不同

荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。

2、二者原理不同

荧光定量PCR实时监测与DNA结合的荧光染料激发的荧光,普通OCR通过检测插入DNA中核算染料的量来测定PCR最终产物量。

3、二者反应要求不同

荧光定量PCR对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp,普通PCR可以扩增长点的片段。

4、二者应用不同

荧光定量PCR主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段,定量PCR仪可以做普通PCR仪的工作,反之不行。

5、二者测量成本不同

定量PCR仪价格较为昂贵,普通的基因扩增仪(PCR仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。但是价格要低很多,而且运行成本也要低很多。

实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。

参考资料来源:百度百科-实时荧光定量PCR

参考资料来源:百度百科-PCR

PCR的全称是:多聚酶链反应,用俗话说就是人为地制造一个环境,使双链基因片段进行复制、扩增

目的基因:就是你想要扩增的基因片段

变性:是在热的环境下使双链解链,一般需要94摄氏度

引物:引导复制的开始,是一种RNA单链片段,能引导复制的起始位置

聚合酶:用的是Taq酶是在火山口找到的一种耐热的酶,在它的作用下以四种脱氧核苷酸(dNTP)为原料合成双链

延伸:通俗点说就是原来的模板链和新合成的单链组成一条新的双链的过程,延伸时间的长短、温度的高低会影响新双链的质量

PCR的大致过程

1、模板DNA

2、(第一轮循环):模板DNA变性和引物复性

3、(第一轮循环):引物延伸

4、(第二轮循环):新合成的双链变性和引物复性

5、(第二轮循环):引物延伸

……

如此往复,直至结束

之后可以泡个琼脂糖电泳看看扩增的情况,也可以测OD值,计算浓度

现在也有real time PCR,实时定量PCR,可以在间隔相等的时间测反应物的浓度,获得相对较准确的数据,比较简便.

总的来说,做分子生物学实验就是一项烧钱的活


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