he染色的操作步骤是什么？

he染色的操作步骤：

将石蜡切片置于烘箱中60℃烤1～2h；

石蜡切片常规二甲苯，乙醇脱蜡至水，

苏木素染10分钟，

流水冲洗，去余色，

0.7%盐酸乙醇分化数秒钟，

流水冲洗，切片变蓝约15分钟，

7.95%乙醇30秒钟，

8.酒精性伊红染30秒，

I 95%乙醇30秒钟，

II 95%乙醇30秒钟，

I 100%乙醇30秒钟，

II100%乙醇30秒钟，

石碳酸二甲苯30秒钟，（1： 4石碳酸1-二甲苯4）

I二甲苯30秒钟，

II二甲苯30秒钟，

中性树胶封片。

HE染色操作流程：

HE染色，即是苏木精-伊红染色法，是形态学最常用的染色方法，在质量较佳的HE染色切片上，各种组织或细胞的一般形态结特点都可以观察到。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

一、实验步骤：

（1）样品制备：对于贴壁生长细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约1×105/ml，滴加于盖玻片上(置于6孔板中)，培养相应时间后，取出细胞爬片，用PBS 洗涤3次。

（2）样品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗涤2次，每次1min。

（3）染核：苏木素染液染色2-3min，自来水洗涤。

（4）分色：镜下观察，若细胞核染色过深，用1%盐酸酒精溶液分色数秒，自来水洗涤。

（5）染胞质：浸入伊红染液染色1min，自来水洗涤。

（6）吹干或自然晾干细胞 爬片后，中性树胶封片。

若细胞用4%多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木素染色12-15min，伊红5min即可。

二、注意事项：

1、染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。因此，要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2、切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。

3、切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。

4、在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。

5、切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。

6、最后封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组织块的面积，如漏出一部分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡。

扩展资料

一、细胞核染色原理：

苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外。

使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

二、细胞浆染色原理：

细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。

当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色，现时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。

伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。

参考资料来源：百度百科-he染色

HE染色是一种组织病理的染色方法，通过这个染色可能明确的区分出组织以及细胞的结构，才可能在显微镜下观察组织以及细胞的形态。这在病理诊断中是最常用的染色方法，通过染色可以让人体的组织在显微镜下显示得更清楚。

染色步骤：

石蜡包埋的组织切片必须经过脱蜡水洗处理才能染色，让水溶性染料渗入组织中，含蜡的组织切片无法进行任何染色。

所以，在染色前必须用二甲苯或替换剂进行彻底脱蜡，经过乙醇洗后，再用水洗。即石蜡组织切片→二甲苯→乙醇（无水乙醇，95%，80%）→水。人们通常把这个过程叫做切片脱蜡至水。脱蜡至水是染色前的必须完成的基本步骤。

以上内容参考 百度百科-HE染色

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