纸层析的概念和原理？

纸层析法（paper

chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数（kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值（rate

of

flow,

rf）来表示。所谓rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（x）与原点至溶剂前沿的距离（y）的比值：

在一定条件下某种物质的rf值是常数。rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。

纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。纸层析法通常可用于叶绿素的色素成分检验，氨基酸的鉴定及测定。

色素分离的原理

纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。

把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次又一次的分配。

结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。

色素概念

色素是赋予一定颜色的原料。人们选择商品往往凭视、触、嗅等感觉,而色素是视觉方面的重要一环，因此色素用得是否适当对制品好坏也起决定作用。

(1)合成色素食用色素从化工合成制得的色素称合成色素。(2)无机色素常用的无机色素有氧化铁、碳黑、氧化铬绿等，它们具有良好的耐光性,不溶于水。(3)天然色素常用的天然色素有胭脂树红、胭脂虫红、叶绿素、姜黄素和叶红素等。

纸层析法分离色素条带是：叶绿体中色素分离原理是各色素随层析液在滤纸上扩散速度不同，从而分离色素。溶解度大，扩散速度快；溶解度小，扩散速度慢。分离的结果是：从上到下依次是：胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b。

1、纸层析法分离出的色素带的颜色分布是橙黄色、胡萝卜素、黄色、叶黄素、蓝绿色、叶绿素a、黄绿色、叶绿素b，叶绿素主要吸收红光和蓝紫光，类胡罗卜素主要吸收蓝紫光。

2、叶绿素a的色素带最宽，原因是叶绿素a的含量最多。色素在纸带上的宽窄主要取决于色素分子本身的结构，以及色素分子随层析液扩散时与固定相之间的亲和力。叶绿素a的分子量大，分子间的相互作用力也大，这样在固定相中移动的速度就慢，色素重叠，使之集中分布在较窄的范围内。

3、光合色素包括叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素、叶黄素，这四种色素在层析液中的溶解度不同，所以在滤纸条上的扩散速度也不同，因此色素带有高有低。由上至下依次是胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b。

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