凯氏定氮法的优缺点及注意事项 凯氏定氮法的优缺点及注意事项有哪些
优点:可用于所有食物的蛋白质分析;操作相对简单;实验成本低;结果准确,是蛋白质测定的经典方法。改进后的方法可用于样品中微量蛋白质的测定。缺点:最终测定的是总有机氮,而不仅仅是蛋白氮;实验时间太长;准确度差,低于缩二脲法;使用的试剂具有腐蚀性。
注释
1、样品要均匀,所以固体样品要预先研磨,液体样品要混合均匀。
2.在蒸馏过程中,蒸汽的产生应该是充分和均匀的。加入样品后,用少量蒸馏水冲洗,以免影响低结果。氧化镁应迅速加入,以防止氨损失。冷凝器的管口应伸入吸收液中,以防止氨的损失。
3.蒸馏后,应将接收瓶的液位从冷凝器的下端移开,并置于其下方。冷凝液要清洗喷嘴内壁,蒸1min后关闭热源,否则会造成吸收液反吸。
凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮含量的方法。即在催化剂的存在下,样品中的有机氮用浓硫酸消化转化为无机铵盐,然后铵盐在碱性条件下转化为氨,用水蒸气蒸馏出来,用过量的硼酸溶液吸收,再用标准盐酸滴定,计算出样品中的氮含量。
因为蛋白质中的氮含量是相对恒定的,所以可以从其氮含量计算出蛋白质的含量,所以这种方法是一种经典的蛋白质定量方法。