一、原理不同
BCA蛋白定量:碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,吸光强度与蛋白浓度成正比。测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。
Bradford法蛋白定量:在一定的浓度范围内,蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比,通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
二、样品中物质含量不同
BCA蛋白定量:样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20、60、80。
Bradford法蛋白定量:样品中SDS低于001%,Triton X-100低于005%,Tween 20、60、80低于0015%。
扩展资料
BCA蛋白定量的注意事项:
1、BCA蛋白定量时,吸光度可随时间的延长不断加深,且显色反应会随温度升高而加快,故如果浓度较低,适合较高温度孵育or延长孵育时间。
2、标准蛋白液的加量应当准确,如果加量不准确,会导致制作出来的标准曲线出现偏差,影响待测样品的浓度计算,所以一方面需要用梯度稀释的方法来配置标准蛋白液,另一方面应使用精确度高的移液枪。
3、为加快BCA蛋白定量测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热,但切勿过热。
4、当结果出现空白组本身就有较高的背景,可用Bradford法蛋白定量重新测定蛋白浓度。
参考资料来源:百度百科-蛋白定量
BCA比较好。
1、BCA钠盐是一种稳定的水溶性复合物,可与Cu+高度特异性结合,产生紫色复合物,有吸湿性,操作简便、准确,灵敏度高,试剂稳定性好,不易受一般浓度去污剂影响,抗干扰能力强。
2、考马斯亮蓝测定快速、简便,只需加一种试剂。完成一个样品的测定,只需要5分钟左右,由于染料与蛋白质结合的过程,大约只要2分钟即可完成。
BCA法测定蛋白质浓度原理:
BCA与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂混合一起即成为苹果绿,即 BCA 工作试剂。在碱性条件下,BCA 与蛋白质结合时,蛋白质将 Cu2+ 还原为 Cu+,工作试剂由原来的苹果绿色变为紫色复合物。562 nm 下其光吸收强度与蛋白质浓度成正比。
BCA 蛋白浓度测定试剂盒,Abbkine的蛋白质定量试剂盒(BCA法)提供一个简单,快捷,兼容去污剂的方法,准确定量总蛋白。
成分:
试剂 A,100 mL
试剂 B,2 mL
标准蛋白(BSA)1 mL×2,1 mg/mL
保存条件运输温度:室温(标准蛋白 4~8 ℃ 运输)
保存温度:室温(标准蛋白 -20 ℃ 保存)
有效日期:12 个月
使用方法:
方法一:96 孔板
1配制 BCA 工作液:根据标准品和样品数量,按 50 体积试剂 A,1 体积试剂 B 配制适量 BCA 工作液。充分混匀。
2将蛋白标准品按 0 μL,1 μL,2 μL,4 μL,6 μL,8 μL,10 μL 加入 96 孔板的蛋白标准品孔中。加灭菌双蒸水补足到 10 μL。取 10 μL 待测样品加入 96 孔板的待测样品孔中。每个测定要做 2~3 个平行。
3向待测样品孔和蛋白标准品孔中各加入 200 μL BCA 工作液(即样品与工作液的体积比为 1:20),混匀。
437 ℃ 温浴 30 min。冷却至室温。
5酶标仪 562 nm 波长下测定吸光度。
6制作标准曲线。从标准曲线中求出样品浓度。
要与测定所用的比色杯对应。BCA工作液室温24小时内稳定,每个测定要做2-3个平行反应,工作液配制的量要与测定所用的比色杯对应,所以bca工作液需要避光。bca工作液是一种稳定的水溶性复合物,可与Cu+高度特异性结合,产生紫色复合物。
BcA是印尼的手机银行,是属于印尼银行的pos机。
刚开始办理手机银行必须本人去当地银行,因为需要在银行系统里登录验证,确保安全。要注意的地方是,我们在银行登录的手机银行必须是本人手机的主卡,办好了,我们就可以看到BCAmobile。
需要注意的地方是它的灯,我们只能在灯是绿色的情况下进行交易,如果灯是蓝色或者红色的话就是提示我们网络不好。
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