革兰染色原理步骤和结果意义

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革兰氏染色(GramStaining)是用于辨别病菌的一种方式:这类染色法运用细菌细胞壁上的微生物物理性质不一样,可将病菌分为两大类,即革兰氏阳性(GramPositive)与革兰氏阳性菌呈阴性(GramNegative)。这一上色方式由荷兰医师汉斯·布拉德·革兰于1884年所创造发明,最开始是用于辨别肺炎链球菌与克雷白氏肺炎菌中间的关联,后营销推广为辨别细菌种类的关键特点之一,对由病菌感染造成的病症的疾病诊断及医治拥有普遍主要用途。革兰氏染色结果是如何的呢?

一、基本原理

根据结晶紫初染和碘液媒染后,在植物细胞内产生了不溶解水的结晶紫与碘的一氧化氮合酶,革兰氏阳性菌因为其植物细胞偏厚、肽聚糖网层级较多且化学交联高密度,故遇酒精或甲苯褪色解决时,因缺水反倒使网眼变小,再再加它没有脂质,故酒精解决不容易出现间隙,因而可以把结晶紫与碘一氧化氮合酶紧紧留到壁内,使其仍呈蓝紫色;而革兰氏阳性菌阴性菌因其植物细胞薄、外膜层脂质成分高、肽聚糖层薄且化学交联度差,在遇脱色剂后,以脂质主导的外膜快速融解,薄而疏松的肽聚糖网不可以阻拦结晶紫与碘一氧化氮合酶的总混,因而根据酒精褪色后仍呈没有颜色,再经过沙黄等鲜红色染剂复染,就使革兰氏阳性菌阴性菌呈鲜红色[1]。

上色的差别主要是阴性与阳性细菌细胞壁的差别所造成的。

血压革兰氏阳性病菌的植物细胞

G细菌细胞壁具备偏厚(20-80nm)而高密度的肽聚糖层,高达50层,占细胞壁成分的40%~95%,它同细胞质的表层紧密相连(图2-9)。有的G细菌细胞壁中带有磷壁酸(teichoic-acid),也称胞壁质(murein),它是凡士林和核糖醇的高聚物,磷壁酸一般以糖或碳水化合物的酯而存有。因为磷壁酸带负电,它在体细胞表面调整正离子浓度值。磷壁酸与细胞生长相关,细胞生长中有自溶素(autolysins)酶类起功效,磷壁酸对自溶有着调整作用,阻拦胞壁过多溶解和壁溶。

假如植物细胞的肽聚糖层被消溶,G体细胞变成原生质体(protoplasts),植物细胞荡然无存,而只留存细胞质。除链球菌感染外,大部分G细菌细胞壁中含非常少蛋白。

血液革兰氏阳性菌呈阴性病菌的植物细胞G—细菌细胞壁比G细菌细胞壁薄(15~20nm)而构造较繁杂,格外膜(outermembrane)和肽聚糖层(2~3nm)(图2-10)。在植物细胞和细胞质膜中间有一个显著的室内空间,称之为壁膜空隙(periplasmicspace)。

外膜G—细菌细胞壁外膜的基本成份是脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),它同细胞质膜相似之处也是两层脂质,但除不饱和脂肪酸外还带有含糖量和蛋白。

LPS的含糖量一部分包含关键含糖量和O-特异含糖量。O-特异含糖量由反复支系的碳水化合物化合物分子结构构成,带有已糖(葡萄糖、半乳糖和鼠李糖)和二脱氨已糖。因为糖的种类不一样,使各种各样G—体细胞具备不一样特点的LPS。关键含糖量(corepolysaccharide)的关键成分是酮脱氨心酸(ketodeoxyoctonate,KDO)。

外膜中还带有几类蛋白质,如蛋白、透亮蛋白质。一些蛋白质具备埋孔功效(porin),管控外部分子结构进到体细胞;有的蛋白质分子结构能够做为噬菌体的蛋白激酶;很多G—病菌对高微生物有高致病是由LPS的成份决策的,它的毒副作用成分常称之为毒素累积(endotoxins)。

革兰氏染色法的重要意义是:革兰氏染色法不仅用来观察细菌的形态,而且它还是细菌鉴定的重要方法。

微生物的细胞小且透明,在普通光学显微镜下不易识别,必须对它们进行染色,使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构。

革兰氏染色的原理:

革兰氏阳性菌的等电点比革兰氏阴性菌低,因而革兰氏阳性菌带负电荷比革兰氏阴性菌多,它与草酸铵结晶紫的结合力大,用碘-碘化钾媒染后,两者等电位均降低。

但革兰氏阳性菌等电位降低得多,故与草酸铵结晶紫结合得更牢固,对乙醇脱色的抵抗力强,草酸铵结晶紫、碘-碘化钾复合物不被乙醇提取,菌体呈紫色,而革兰氏阴性菌则相反,菌体呈红色。

1、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响,难以严格规定。

2、染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后,应吸去玻片上的残水,以免染色液被稀释而影响染色效果。

3、选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h,Ecoli培养24h。若菌龄太老,由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。

扩展资料:

在实验中经常会出现假阳性和假阴性的结果,假阳性主要是由于脱色不完全,可能是由于涂片过厚,或者是结晶紫染色过度,导致脱色不完全。假阴性可能是因为细胞固定过度,造成细胞壁通透性的改变,而出现假阴性结果;另外,细胞培养时间太长,可能已经有部分细胞发生死亡或者自溶,也导致细胞壁通透性的改变而出现假阴性结果,

参考资料来源:百度百科-革兰氏染色

革兰氏染色的步骤和原理如下:

步骤:

1、首先在载玻片上滴一小滴蒸馏水,用灼烧过的接种针挑取少量细菌,置载玻片的水滴中与水混合并涂抹开,注意涂抹要均匀平坦,涂抹后直径约为1 cm的薄层。

2、固定。将载玻片在火焰上方固定。

3、染色。加路哥式碘液大概一滴,作用1 min后用水冲洗,注意流水不要直接往薄层上冲,用过滤纸吸干。

4、脱色。用95%乙醇脱色,一般脱色时间大概为30 s。

5、观察。

干燥后,用油镜镜检观察,并做好记录。

原理:染色后细菌与环境形成鲜明对比,可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征,而用以分类鉴定。

革兰染色在医学上的重要意义:

1、鉴别细菌:用革兰染色法可将所有细菌分成革兰阳性菌及革兰阴性菌两大类,便于初步识别细菌。

2、选择药物:临床上可很据病原菌的革兰染色性,选择有效的抗生素用于治疗。

3、与致病性有关:有些革兰阳性菌能产生外毒素,而革兰阴性菌则主要具有内毒素,两者致病作用不同。

问题一:革兰氏染色法的重要意义是什么 革兰氏染色法的重要意义是:

革兰氏染色法不仅用来观察细菌的形态,而且它还是细菌鉴定的重要方法,

微生物的细胞小且透明,在普通光学显微镜下不易识别,必须对它们进行染色,使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构。因此,微生物染色技术是观察微生物形态结构的重要手段。

革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法(Gram stain)不仅能观察到细菌的形态,而且还可将所有细菌区分为两大类:染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌,用G+表示;染色反应呈红色(复染颜色)的称为革兰氏阴性细菌,用G-表示。细菌对革兰氏染色的不同反应,是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的,在染色过程中,当用乙醇处理时,由于脱水而引起网状结构中的孔径变小,通透性降低,使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色,因此,呈现蓝紫色;革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低,而脂类物质含量高,当用乙醇处理时,脂类物质溶解,细胞壁的通透性增加,使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色,然后又被染上了复染液(番红)的颜色,因此呈现红色。

问题二:革兰氏染色在微生物学中有何实践意义 因为细菌细胞壁肽聚糖厚薄不同,造成了对不同抗生素的反应性。革兰氏染色是细菌鉴定的一个基础实验,肽聚糖厚染色为阳性,单纯染色可以确定初步用药方案,为挽救病人生命做出快速处理措施,例如发热病人血培养阳性,涂片为革兰氏阳性菌,就可以把针对阳性菌有效果的药物先用上,等具体细菌鉴定结果和药敏结果出来之后再调整用药。

问题三:革兰氏染色的临床意义 其重要的临床意义在于:1鉴别细菌 2选择药物 3与致病性有关:革兰氏阳性菌能产生外毒素,革兰氏阴性菌能产生内毒素;而内毒素主要是指革兰氏阴性菌胞壁成分中的脂多糖,两者的致病作用不同。

问题四:革兰氏染色法在微生物学中有何重要意义 其重要的临床意义在于:1鉴别细菌 2选择药物 3与致病性有关::革兰氏阳性菌能产生外毒素,革兰氏阴性菌能产生内毒素,两者的致病作用不同。

问题五:革兰氏染色在微生物学中有何实践意义 革兰氏染色最重要的就是把细菌分为革兰氏阴性菌和阳性菌,同时通过染色也使细菌形态容易辨认。

区分革兰氏阴性和阳性,最重要的是为细菌的鉴定明确一个大方向,这是非常重要的。细菌的形态也为细菌鉴定上提供依据。此外,对革兰氏阴性或阳性菌的感染,治疗是不同的。

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