如何检测生物组织中的还原糖

常见的糖有葡萄糖，果糖，麦芽糖，和蔗糖。

前三种糖的分子内都含有游离的、具有还原性的半缩醛羟基（或羟基—CHO），因此叫还原糖。

在实验中，斐林试剂能检验生物组织中可溶性的还原糖存在与否。（而不能鉴定可溶性的非还原糖。）

斐林试剂有质量浓度为01g/ml的氢氧化钠溶液和质量浓度为005g/ml的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2与加入的还原糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀。

其间，颜色变化过程：浅蓝色--棕色--砖红色（沉淀）。

关于还原糖脂肪蛋白质的检测，内容如下：

实验原理：某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。可溶性糖中的还原糖（如葡萄糖、果糖），与班氏试剂发生作用，可以生成砖红色的氧化亚铜沉淀。脂肪可以被苏丹III染成橘**。蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可以产生紫色反应。因此，可以根据与某些化学试剂所产生的颜色反应，鉴定生物组织中糖、脂肪或蛋白质的存在。

实验材料:1、做可溶性还原糖的鉴定实验，应选择含糖量较高、颜色为白色或近于白色的植物组织（如苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等）。

2、做脂肪的鉴定实验，应选择富含脂肪的种子，以花生种子为最佳，实验前需浸泡3-4h。

3、做蛋白质的鉴定实验，可用鸡蛋蛋白或用浸泡1-2d的黄豆种子（或豆浆）。

仪器和试剂:、仪器  水果刀、镊子、试管、试管夹、试管架、大小烧杯、量筒、滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、吸水纸、研钵、石英砂、纱布、显微镜

试剂:班氏试剂、苏丹III染剂、双缩脲试剂、体积分数为20%的酒精溶液、蒸馏水。

含有醛基或酮基的糖，在碱性条件下可转变成非常活泼的烯二醇结构，具有一定的还原性，可被弱氧化剂氧化成相应的糖酸。这类糖称为还原糖。单糖均是还原糖，双糖中的乳糖、麦芽糖也具有还原性。还原糖常用的测定方法有直接滴定法、高锰酸钾滴定法和比色法。

直接滴定法

原理

在加热条件下，以次甲基蓝为指示剂，以已除去蛋白质的被测样品溶液，直接滴定已标定过的费林氏液，样品中的还原糖与斐林试剂中的酒石酸钾钠铜络合物反应，生成红色的氧化亚铜沉淀，氧化亚铜再与试剂中的亚铁氰化钾反应，生成可溶性化合物，到达终点时，稍过量的还原糖立即将次甲基蓝还原，使蓝色褪色，呈现出原样品溶液的颜色，即为终点。根据样品消耗体积，计算还原糖量。

本方法测定的是一大类具有还原性的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等，只是结果用葡萄糖或其他转化糖表示而已。

本法是国家标准分析方法，适用于所有食品中还原糖的快速测定。检出限01mg。

高锰酸钾滴定法

原理

样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。

本法为国家标准方法（GB50097-85），适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。准确度和重现性均优于直接滴定法。

检测还原糖的最佳的实验材料是梨。梨中富含还原糖，且颜色浅，适于作为检测还原糖的实验材料。还原性糖主要有葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖等。

还原糖是指具有还原性的糖类。在糖类中，分子中含有游离醛基或酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。

在待测组织样液中加入斐林试剂甲和乙，颜色变为蓝色，在加热过程中，颜色由蓝色变为砖红色。

斐林试剂与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。

实验材料准备

植物组织是常用的实验材料,但必须加以选择。本实验最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官),而且组织的颜色较浅,或近于白色的,如苹果和梨的果实。经试验比较,颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。

操作方法

①向试管内注入2mL待测组织药液。

②向试管内注入1mL斐林试剂（甲液和乙液等量混合均匀后再注入）。

③将试管放入盛有50～65℃温水的大烧杯中加热约2min。

④观察试管中出现的颜色变化。

糖类中的还原糖主要有葡萄糖、麦芽糖等．检测还原糖的试剂是斐林试剂，斐林试剂是由甲液和乙液组成，该试剂的甲液是质量浓度为01g/mL氢氧化钠溶液，乙液是质量浓度为005g/mL硫酸铜溶液，该试剂的使用方法是先向试管内注入待测组织样液，将甲液和乙液混合均匀注入试管，再水浴加热，观察现象．

故答案为：

葡萄糖、麦芽糖   斐林试剂       质量浓度为01g/mL氢氧化钠溶液      质量浓度为005g/mL硫酸铜溶液     向试管内注入待测组织样液      水浴加热

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