在将杂交瘤细胞进行扩大培养前需要经过什么过程

需要经历分离筛选，然后进行扩大培养。

用8-氮鸟嘌呤（一种嘌呤类似物）来对瘤细胞进行筛选，它可以参与核酸合成的旁路途径，但是由此合成出来的核酸不能具备正常核酸那样的功能，因此这种细胞就都会死去，能存活下来的细胞都是不能进行旁路合成核酸，该过程的本质就是为了筛选出HGPRT缺陷型细胞株。

HGPRT缺陷型细胞株与B细胞进行融合，融合后的细胞则既能通过主要途径合成核酸，也能通过旁路合成，而未融合瘤细胞和瘤细胞自身融合细胞仍然只能通过主要途径合成核酸。

扩展资料：

筛选的原理和方法：

细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。普遍采用的HAT选择性培养基：在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：

一条途径是生物合成途径(“D 途径”)，即由氨基酸及其他小分子化合物合成氨基酸，为DNA分子的合成提供原料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基蝶呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的D途径。

另一条途径是应急途径(“S途径”，它是利用次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核苷转移酶和胸腺嘧啶核苷激酶催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。

杂交瘤抗体技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠细胞作小鼠骨髓瘤细胞。脾淋巴细胞的主要特征是它的抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即所谓永生性。在选择培养基的作用下，只有b细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才具有持续增殖的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞，这种杂种细胞叫做杂交瘤细胞。

B淋巴细胞能产生抗体,但在体外培养下不能增殖;而骨髓瘤细胞在体外培养下能不断增殖,但不能产生抗体科勒和米尔斯坦利用这两种细胞的特点,很巧妙地将它们融合在一起,形成一个杂交瘤细胞

这种既能产生抗体又能繁殖的杂交瘤细胞是这样制备的:首先将抗原(某一病菌)不断地注射给小鼠,使小鼠的脾脏生产能抵御病菌的B淋巴细胞

接着将B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞放在一个培养皿里培养,并加入融合剂,使两种细胞融合形成许多杂交瘤细胞

然后从这些杂交瘤细胞中经过多次的培养筛选,最后筛选出由一个杂交瘤细胞分裂形成的细胞群,称之为克隆细胞这些克隆细胞同时具有两种细胞的特性,既能在体外繁殖,又能产生抗体由于它产生的抗体是单一性的,纯度又高,故被称为单克隆抗体

单克隆抗体既然具有能准确地诊断某种疾病的性能,于是科学家们又产生了进一步利用这项技术,将单克隆抗体与药物结合起来的想法,因为这样就可以达到将药物准确地运到入侵者那里,将病魔加以消灭的目的

1970年,穆顿等人曾把白喉毒素结合到多克隆抗体上,发现它有杀伤病菌的作用不过由于用的是多克隆抗体为运载体,其识别病菌能力不够专一,所以效果并不理想

1975年,杂交瘤技术的出现,使科学家们可以改用单克隆抗体为运载体了

由于单克隆抗体的专一性强,它能像导弹一样,准确无误地向入侵者攻击,把各种毒素送到目的地,有效地杀伤入侵者,故人们称之为“生物导弹”,而把这种疗法称为导向治疗

当前,一些科学家正在研究把干扰素抗癌物质等作为弹头,探索制备抗癌的生物导弹

另外,由于用小鼠制备的鼠源单克隆抗体进入人体后,因是异种蛋白质,容易使人产生过敏反应为了克服鼠源抗体的这一缺点,科学家们正在进行利用基因工程改造抗体,使之人源化的研究

目前,生物导弹用于抗癌治癌还存在许多困难,离实际应用尚有一段距离但是,科学家们仍然对生物导弹的应用持乐观态度,从1975年建立单克隆抗体算起,单克隆抗体研究进入了第四个10年可以说,虽然发展缓慢,但是步伐坚实

杂交瘤细胞

经选择性培养基筛选后的杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞。通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不超过一个（理论上30%的孔中细胞数为0时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。

阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。

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