琼脂糖凝胶电泳原理和操作步骤

澳门大三巴牌坊2022-08-02  21

琼脂糖凝胶电泳的原理 琼脂糖凝胶电泳的原理和方法

大小不同的DNA片段在碱性条件下带负电,在电流的作用下从负极向正极移动。根据不同DNA分子片段的大小和形状不同,它们在电场中的游动速率也不同。因此,同时紫外线照射后可以看到DNA的位置,从而达到分离鉴定的目的。

琼脂糖凝胶电泳步骤:1 .用蒸馏水清洗制胶工具,准备制胶板,用琼脂封住模具边缘,设置梳子;2.根据待分离样品(DNA)的大小,配制适当浓度的琼脂糖凝胶。准确称取一定量的干琼脂糖粉末,置于适当体积的锥形瓶中,加入一定量的电泳缓冲液(约30ml TAE);放入微波炉,加热融化,冷却一会儿(不要烫手)。

3.将融化的琼脂溶液摇匀,倒入电泳槽中,等待凝固;4.室温固化30-40分钟左右,小心拔出梳子,取出固化的凝胶,放入电泳槽中,准备上样;5.将电泳缓冲液(TAE)倒入电泳槽中;距胶面约1毫米时,清除胶孔内的气泡。

  6、上样,5ulDNA样品加入1ul上样缓冲液(loading buffer)和1ul的染料,用抢混匀后加入到凝胶孔内;7、上样结束,接通电源,红色正极,黑色负极,DNA样品有负极往正极运动,加样孔侧为负40-50v电压,电压30敏左右即可(

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