世博会园区开放时间是9：00~24：00，共15个小时。而各参展方展区开放时间（即开馆时间）为9：30~22：30，共13个小时。每天，园区21：00禁止入场，大多数展馆在22：00禁止入馆。若在平日（2010年5月4日~2010年9月30日；2010年10月8日~2010年10月24日）晚上17点后参观，可在园区各进口处当场购买夜票，票价为90元人民币，同样在21：00禁止入园。闭馆时间≠闭园时间，世博园区各场馆一般晚上10时30分闭馆。如果提早闭馆，一定会通过广播和大屏幕通知排队者。”世博局参观者服务中心透露，一些游客误以为闭馆时间和闭园时间一样，等赶到心仪的场馆门口时却吃了“闭门羹”，搞清楚各场馆闭馆时间相当重要。
按规定，世博园区运行时间9:00至24:00，场馆开放时间9:30至22:30。有读者反映，个别场馆不到晚上10时30分便“铁将军把门”，他们白跑一场，十分扫兴。记者向各场馆求证，工作人员表示，是否提前闭馆或临时闭馆，决定权在参展方。如果提前或临时闭馆，他们会通过广播和大屏幕通知排队者。同时，安保人员和志愿者也会告诉游客。
但有游客质疑：“如果我们排队排到一半，突然被告知提前闭馆或临时闭馆，那之前的排队不是白费吗？”对此，一些场馆的做法值得借鉴。比如人气一直很旺的沙特馆，闭馆前会算好人数，排在队伍中的游客，一定会让他们在闭馆前进入；还未排队的游客，则劝阻他们不要排队了。
有游客提出建议：“一些热门场馆能否推迟闭馆时间？”世博会事务协调局局长洪浩表示，是否推迟闭馆时间，决定权在参展方。据了解，推迟闭馆时间在往届世博会上有过先例。
