裂解液是什么

红细胞裂解液

红细胞裂解液是一种去除红细胞最简便易行的方法，即用裂解液裂解红细胞，它既不损伤有核细胞又能充分的去除红细胞。裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化，淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不含红细胞，可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和提取等。

1.     裂解液成分了解：

（1）大多有效成分都是去垢剂，那么去垢剂是什么呢？

去垢剂功能的关键是具有两亲结构。所有的去垢剂都具有亲水“头部”区域和疏水“尾部”区域这一特征，常用的阴离子去垢剂SDS结构如图：

这些结构特性使得去垢剂可以在水性介质中聚集。在足够高的浓度下，每个分子的极性亲水区域朝向极性溶质（水），而疏水区域聚集在一起，形成一个具有疏水核心的热力学稳定的胶束。去垢剂胶束的疏水核心区域与蛋白质的疏水表面结合，形成可溶性的蛋白质-去垢剂复合物。

去垢剂根据其亲水基团的不同分为：阴/阳离子去垢剂、非离子型两性去垢剂、两性去垢剂。

a 阴/阳离子型去垢剂：作用强烈，会更大程度的改变蛋白质的结构，更容易受到pH、离子强度和反离子的性质等因素影响；

b 非离子型去垢剂：作用温和，由于不分离蛋白质-蛋白质键，非离子型去垢剂使得蛋白质可以保留其天然的结构和功能，不易变形（疏水链长度较短的去垢剂更易引起蛋白质失活）；

c 两性去垢剂：相对于离子型去垢剂其更少产生变性，相对于非离子型去垢剂，又可以更有效的破坏蛋白质-蛋白质键并减少聚集。

（2）配置裂解液都需要Tris缓冲液，又是什么呢？

a. Tris学名叫三羟甲基氨基甲烷，它和Tris-base是一个东西，1M的Tris溶液的pH值大约是10～11，即常说的Tris碱；

b. Tris-cl和Tris-HCl是一个东西，就是写法上有所不同，即常说的Tris酸；

c. Tris-HCl就是在Tris-base的溶液中加入适当量的盐酸，调成你所需要的PH值。

2.    常用裂解液种类：

（1）NP40 lysis buffer：

a. 主要成分50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40。

b. 概述：NP-40是一种很温和的非离子型去垢剂，1%浓度基本可以破坏掉细胞膜，而对核膜的破坏作用较弱，结合特定的缓冲液可以获得胞浆蛋白。与蛋白结合力强，用于防止物质分子疏水间相互作用，确保蛋白的充分溶解和结构稳定。

c. 用途：常规的Western、IP和co-IP和ELISA，本实验室是做核蛋白的，由于获取核蛋白需要裂解细胞核膜，因此本lab WB实验用1%NP40+0.1%SDS（可使蛋白变形），IP/pull down实验用1%NP40+超声（保留蛋白结构）。

（2）SDS lysis buffer：

a. 主要成分：50mM Tris (pH8.1)，1% SDS

b. 概述：是一种比较强烈的细胞组织裂解液，可裂解核膜。在SDS-PAGE电泳中，SDS能使蛋白氢键和疏水键打开并结合蛋白分子，使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度电荷且远远超过蛋白分子原有电荷，从而掩盖蛋白间电荷差别，使得电泳迁移率只取决于分子大小这一因素。

c. 用途：用于常规Western、ChIP等

各种常用裂解液的比较推荐参考碧云天网页： https://www.beyotime.com/lysis-buffer.htm

具体如下:

1、裂解液：的确是ACK裂解液作用更柔和些

配方：

NH4CL8.29g

KHCO31.00g

Na2EDTA37.2mg

溶于1000mL蒸馏水，pH7.2-7.4，效果一直很好。

注意：

（1）裂解液如果放在冰箱里，一定要预热，37度即可。裂解期间试管也可水浴，但如果是夏天室温比较高则不必；

（2）裂解5min后立刻离心（从所有管都混匀后计时间）；

（3）PBS离心洗涤2次；

（4）裂解液pH值很重要，最好一次不要配多，时间长效果不好，我一般一次配100mL，

避光保存。

2.离心速度：800-1000rpm，5min

3.研磨轻柔很重要

4.培养淋巴细胞的最佳培养液是RPMI1640，因为是原代细胞，要用10%胎牛血清。还有非常重要的一点，要想让细胞增殖得好，必须加二巯基乙醇（beta-2ME）

5.细胞密度1－2X10^6/mL

---