牛肉膏蛋白胨培养基的配制

牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：

牛肉膏 3g

蛋白胨 10g

NaCl 5g

琼脂 15—20g

水 1000ml

pH 7．4—7．6

三、器材

牛肉膏，蛋白胨， NaCl，琼脂；

1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；

试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（ pH 5．5—9．0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。

四、操作步骤

1．称量

按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。

2．溶化

在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。

3．调pH

在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7．6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。

对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。

4．过滤

趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的观察。一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去（本实验无需过滤）。

5．分装

按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图Ⅴ-1。

分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。

(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。

(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，如图Ⅴ-2。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。

6．加塞

培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）。

7．包扎

加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

8．灭菌

将上述培养基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2），121．3℃， 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。

9．搁置斜面

将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

10．无菌检查

将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。

附：棉塞的制作

棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染；二是保证通气良好。因此，棉塞质量的优劣对实验的结果有很大的影响。正确的棉塞要求形状、大小、松紧与试管口（或三角烧瓶口）完全适合，过紧则防碍空气流通，操作不便；过松则达不到滤菌的目的。加塞时，应使棉塞长度的1/3在试管口外，2/3在试管口内，如图Ⅴ-3。棉塞的制作过程如图Ⅴ-4。

此外，在微生物实验和科研中，常要用通气塞。所谓通气塞，就是几层纱布（一般为8层）相互重叠而成，或是在两层纱布间均匀铺一层棉花而成。这种通气塞通常加在装有液体培养基的三角烧瓶口上。经接种后，放在摇床上进行振荡培养，以获得良好通气促使菌体的生长或发酵。通气塞的形状

牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：

牛肉膏3g。

蛋白胨10g。

NaCl 5g。

琼脂15—20g。

水1000ml。

pH 7.4—7.6。

器材：

牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂。

1mol/L NaOH，1mol/L HCl。

试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 5．5—9．0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。

简要步骤

在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。

等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2～7.6,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌：1.05千克每平方厘米、121摄氏度维持15~30分钟。

牛肉膏蛋白胨主要提供碳源，氮源，磷酸盐，维生素和无机盐。牛肉膏蛋白胨是一种琼脂培养基，因为价格相对便宜又容易制作，在微生物培养中有着广泛的应用。

牛肉膏蛋白胨提供什么

由于不同的微生物需要的营养不同，一种培养基不可能适合所有微生物，但牛肉膏蛋白胨培养基提供的营养是大部分微生物都需要的。

牛肉膏蛋白胨培养基在制作与使用过程中需要注意规范使用，防止细菌污染，否则会使培养基失去营养。

在牛肉膏蛋白胨培养基制作过程中可以加入其他营养物质来制成不同的培养基，用来培养不同的微生物。

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