一般的通用显色剂:
第一个就是硫酸的溶液了,硫酸与水、甲醇或者乙醇按照一比一的浓度进行调配。还有就是1.5摩尔每升的硫酸溶液与0.5到1.5摩尔每升硫酸铵溶液,喷后110摄氏度烘烤十五分钟,此时不同的有机化合物会显示不同的颜色。
第二个是含有0. 5%碘的氯仿溶液,对很多化合物显黄棕色。
第三个是PH值呈中性且含有0.05%高锰酸钾的溶液,针对还原性较为容易的化合物,通常会在淡红色背景上面显现出黄色。
第四个是酸性高锰酸钾试剂,喷含有1.6%高锰酸钾浓硫酸溶液,在溶解过程时刻需注意防止爆炸,喷后薄层在180摄氏度加热十五到二十分钟。
第五个是酸性重铬酸钾试剂,喷5%重铬酸钾浓硫酸溶液,必要时在150高温条件下烤薄层。
第六个是5%磷钼酸乙醇溶液,喷后120摄氏度烘烤,还原性化合物显蓝色, 再用氨气薰,则背景变为无色。
第七个是铁氰化钾-三氯化铁试剂,还原性物质显蓝色, 再喷2摩尔每升盐酸溶液,则蓝色加深。
显色剂的选择原则有以下四点:
(1)显色剂的灵敏度要高。
(2)显色剂的选择性要好。
(3)所形成的有色化合物的稳定度要大,颜色要稳,而且有确定的组成比。
(4)其他,如显色剂的溶解度、稳定性及性格等。
显色剂分类:
显色剂有两类:通用显色剂和特效显色剂。根据被检物的化学组成是否遭受破坏,显色剂分为破坏性显色剂和非破坏性显色剂。
在实验中我们一般将它调配成A,B两种液体,当需要显色时就分别加入A,B液,当混合液与实验中复合物(抗原抗体复合物)反应就会产生显色效果。
A液一般由:PBS缓冲液,柠檬酸,ED-TA乙二氨四乙酸,ProcLin-300,过氧化氢(过氧化氢挥发性太高,容易丢失,我们现在正用过氧化脲来代替,效果还不错)组成。
B液一般由:PBS缓冲液,柠檬酸,ED-TA乙二氨四乙酸,ProcLin-300,硫代硫酸钠等。
由于显色液的反应一旦开始就一直持续反应,所以,当达到理想效果时一定要终止反映,就需要加入终止液了。