琼脂糖凝胶电泳原理

1、琼脂糖凝胶电泳原理：琼脂糖凝胶具络，物质分子通过时到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相比于蛋白质太大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。

2、核酸是两性电解质，其等电点为pH2-25，在常规的电泳缓冲液中（pH约85），核酸分子带负电荷，在电场中向正极移动。核酸分子在琼脂糖凝胶中泳动时，具有电荷效应和分子筛效应，但主要为分子筛效应。线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中移动，因而迁移得越慢。

琼脂糖凝胶电泳marker的作用是分子标记。

DNA分子标记具有的优越性有：大多数分子标记为共显性，对隐性性状的选择十分便利；基因组变异极其丰富，分子标记的数量几乎是无限的；在生物发育的不同阶段，不同组织的DNA都可用于标记分析；分子标记揭示来自DNA的变异；

表现为中性，不影响目标性状的表达，与不良性状无连锁；检测手段简单、迅速。随着分子生物学技术的发展，DNA分子标记技术已有数十种，广泛应用于遗传育种、基因组作图、基因定位、物种亲缘关系鉴别、基因库构建、基因克隆等方面。

扩展资料

标记（Marker），染色体上一个可以被识别的区域（比如限制性内切酶的酶切点，基因的位置等）。标记的遗传能够被检测出来。标记可以是染色体上有表达功能的部分（比如基因），也可以是没有编码蛋白质功能但遗传特性能够被检测出来的部分。

蛋白marker可分为：

未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准；

预染的Marker即单色预染和多色预染。

在western Blot过程中，分子量Marker就像个螺丝钉一样虽然是个小细节，然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。

这个WesternBlot参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小，只有标准量精确无误，实验结果才有说服力，除此之外，蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用，所以选择正确的蛋白Marker也是westernblot实验成功的必要条件之一。

参考资料来源：百度百科-Marker

参考资料来源：百度百科-分子标记

上海腾拔仪器科技有限公司的Universal TA质构仪或Rapid TA凝胶强度测定仪都可以用于测定琼脂的凝胶强度 。

1 样品准备

在已称重的400毫升烧杯中用增量法称取琼脂3克，用230毫升蒸馏水使之均匀分散并发生溶胀，加热到沸腾并不断搅拌，沸腾开始后，宜用小火焰加热以保持沸腾有助于减少泡沫，80秒后把烧杯从火焰移开，此时溶液的总重可达220g，如果不够可加水至220g。

为避免快速蒸发，溶液应从空气流通区域移开，令其在室温下静置，冷却2小时。然后把装有溶液的烧杯浸入25℃水浴中，持续22小时左右后称取凝胶的净重（应在195-205g之间）。最后，插入刮刀以剥离黏合于玻璃容器壁的凝胶，备用。

2 测试方法

将准备好的琼脂样品放于仪器的正下方，然后启动软件，配套的5mm柱形探头将会以一定的速度向下移动，直至接触到琼脂样品的表面开始实验，当探头一直往下压直至凝胶表面刚好破裂（成孔）时，软件自动记录下此时的受力情况，这个峰值被定义为琼脂的凝胶强度。依次将样品按0°、180°、90°和360°进行测试，计算琼脂凝胶的平均强度。

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