miRNA是低等和高等生物都存在的 作用在靶基因的mRNA 3’UTR区域 通过降解或者抑制翻译来抑制靶基因表达 一条miRNA可以有多个靶基因
siRNA主要存在于低等生物 可以作用在靶基因的mRNA任何地方 通过降解来抑制表达 一般一条siRNA只针对一个靶基因 可以通过人为的设计合成siRNA来导入高等生物细胞中诱发抑制作用
shRNA是将siRNA构建到表达载体中而已
再详细就自己分别百度去吧
Small interfering RNA (siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。
Small interfering RNA (siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默
RNA干涉(RNAinterference,RNAi)是指内源性或外源性双链RNA(dsRNA)介导的细胞内mRNA发生特异性降解,从而导致靶基因的表达沉默,产生相应的功能表型缺失的现象
RNA干涉(RNAi)在实验室中是一种强大的实验工具,利用具有同源性的双链RNA(dsRNA)诱导序列特异的目标基因的沉寂,迅速阻断基因活性siRNA在RNA沉默通路中起中心作用,是对特定信使RNA(mRNA)进行降解的指导要素siRNA是RNAi途径中的中间产物,是RNAi发挥效应所必需的因子siRNA的形成主要由Dicer和Rde-1调控完成由于RNA 病毒入侵、转座子转录、基因组中反向重复序列转录等原因,细胞中出现了dsRNA,Rde-1(RNAi缺陷基因-1)编码的蛋白质识别外源dsRNA,当dsRNA达到一定量的时候,Rde-1引导dsRNA与Rde-1编码的Dicer(Dicer是一种RNaseIII 活性核酸内切酶,具有四个结构域:Argonaute家族的PAZ结构域,III型RNA酶活性区域,dsRNA结合区域以及DEAH/DEXHRNA解旋酶活性区)结合,形成酶-dsRNA复合体Dicer 切割后形成siRNA,然后,在ATP的参与下,细胞中存在的一种RNA诱导的沉默复合体RNA-induced silencing complex RNAi干涉的关键步骤是组装RISC和合成介导特异性反应的siRNA蛋白siRNA并入RISC中,然后与靶标基因编码区或UTR区完全配对,降解靶标基因,因此说siRNA只降解与其序列互补配对的mRNA其调控的机制是通过互补配对而沉默相应靶位基因的表达,所以是一种典型的负调控机制siRNA识别靶序列是有高度特异性的,因为降解首先在相对于siRNA来说的中央位置发生,所以这些中央的碱基位点就显得极为重要,一旦发生错配就会严重抑制RNAi的效应
RNAi在基因沉默(silent gene)方面具有高效性和简单性,所以是基因功能研究的重要工具
大多数药物属于标靶基因(或疾病基因)的抑制剂,因此RNAi 模拟了药物的作用,这功能丢失(LOF)的研究方法比传统的功能获得(GOF)方法更具优势因此, RNAi 在今天的制药产业中是药物靶标确认的一个重要工具同时,那些在靶标实验中证明有效的siRNA/shRNA本身还可以被进一步开发成为RNAi药物
在药物标靶发现和确认方面,RNAi技术已获得了广泛的应用生物技术公司或制药公司通常利用建立好的RNAi文库来引入细胞,然后通过观察细胞的表型变化来发现具有功能的基因如可通过RNAi文库介导的肿瘤细胞生长来发现能抑制肿瘤的基因一旦所发现的基因属于可用药的靶标(如表达的蛋白在细胞膜上或被分泌出细胞外),就可以针对此靶标进行大规模的药物筛选此外,被发现的靶标还可用RNAi技术在细胞水平或动物体内进一步确认
在疾病治疗方面,双链小分子RNA或siRNA已被用于临床测试用于几种疾病治疗,如老年视黄斑退化、肌肉萎缩性侧索硬化症、类风湿性关节炎、肥胖症等在抗病毒治疗方面,帕金森病等神经系统疾病已经开始初步采用RNA干扰疗法肿瘤治疗方面也已经取得了一些成果
在低等生物中同时存在miRNA和siRNA,在高等生物中只有miRNA,但可以通过外源转入siRNA起作用
miRNA的结合位点通常位于3`UTR,而siRNA不确定
miRNA和其target是不完全互补,一般只有2-8位的碱基是完全互补的,而siRNA是完全互补配对
siRNA的作用结果是使mRNA剪切,而miRNA有的是剪切,有的只是结合上去抑制翻译
siRNA是一对一的,一条siRNA只针对一个基因,而miRNA是一对多的,一条可以抑制很多基因
大概就这些吧
有啥不明白再问吧
In readily transfected cells treated with potent and effective siRNAs such as the new AmbionSilencer Select siRNAs, near-maximal silencing can be achieved for 5–7 days赛默飞他们siRNA干扰持续大概一个星期左右。要看你的具体的干扰的细胞,干扰效果等情况。但是,肯定是很短的。建议;重新干扰。--汉恒生物
sirna正反都要加。
在转染实验过程中,需要注意以下几点:A纯化siRNA:在转染前要确认siRNA的大小和纯度。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15%20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸、小的寡核苷酸、蛋白和盐离子。
结构
siRNA具有明确定义的结构:具有磷酸化5'末端的短(通常20至24bp)双链RNA(dsRNA)和具有两个突出核苷酸的羟基化3'末端。该切酶酶催化生产的siRNA由长的dsRNA和小发夹RNA。siRNA也可以通过转染引入细胞。由于原则上任何基因都可以被具有互补序列的合成siRNA敲低,因此siRNA是在后基因组时代验证基因功能和药物靶向的重要工具。
简单的讲,scrambled是杂乱的意思,
scrambled siRNA是针对目的siRNA的一个对照,
它是无功能的,
用以设立对照组检验目标siRNA的可能产生的抑制功能。
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