ELISA实验数据处理方法是怎样的

ELISA试剂盒在国内有许多种叫法：例如：ELISA检测试剂盒、ELISAKit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来，得到全世界科研工作者的认可及推崇，在欧美及中国获得很大的推广，尤其是国内生化领域的长足发展。Elisa生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。本章交流分享：ELISA实验数据处理方法是怎样的？想要了解的同学欢迎来电咨询。

1、拟和曲线：

输入行： 浓度值， 如0 10 50 100

输入第二行：该浓度下的调整后的od值，如0 0586 1397 1997 342

选择这些输入的数据，用插入里的图表按钮，进入图表向导，在“标准类型”中选择“xy散点图”；在“子图表类型”中选择“折线散点图”，按“下一步”；选择“系列产生在行”，按“下一步”；数据标志，可以填写：如数据y轴，OD值；数据x轴，浓度；按下一步，点击完成。可得曲线图。

单击曲线，按右键，选择“添加趋势线”，在类型中，选择多项式；在选项中，选择显示公式，选择显示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面说的方法：双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。

2、计算浓度：

次实验：

标准曲线为：

y = -4E-05x2 + 0026x

R2 = 09745

为例，已知OD值，计算浓度。

由于y = -4E-05x2 + 0026x，所以可以得到：

4E-05x2 －0026x ＋y＝0

ax2 ＋bx ＋y＝0

a＝4E-05；b＝－0026；

x＝（－b－（bb－4ay）（平方根））/(2a)

代入a，b，和y值，得

x＝（0026－（00260026-000016y）(平方根）)/(2000004）

在excel里可以用以下公式表示：

x＝(0026-EXP(LN(00260026-000016y)/2))/(2000004)

通用公式为：

x＝（－b－EXP(LN（bb－4ay）/2)）/(2a)

应用excel的公式拷贝功能，计算所有浓度

此前joker已经给大家介绍了医生、律师、社工以及空军四位求生者的天赋攻略，但在网易非对称对抗竞技手游《第五人格》里，求生者还有其他个性迥异的人物，这一回继续从天赋使用说起，来聊一聊园丁、前锋、神棍、机械师这四位角色。

园丁

园丁具有巧手匠心特性，随身携带工具箱，且使用工具箱无消耗，可以无限拆除场景中的处刑架使其无法正常使用，对局定位是“拆钩子”、“辅助”、“万金油”。但随之而来的问题，园丁也特别容易暴露自己的位置给屠夫。因此核心天赋上，园丁和社工基本一致，推荐“破窗理论”、“膝跳反射”和“云中漫步”，目的也是为了更容易逃脱屠夫的追捕。

破窗理论：跨越窗户后，冲刺时增加50%移动速度，持续3秒，冷却40秒

膝跳反射：跨越板子后，冲刺时增加30%/40%/50%移动速度，持续3秒，冷却60/50/40秒

云中漫步：留下的脚印持续时间减少1/15/2秒

前锋

前锋是一个优缺点都极为明显的高阶角色，对局定位是“溜监管者”、“刚正面”。他的优点在于能和屠夫的正面对抗，前锋翻板子的速度极快，在板子对面面对屠夫时非常有优势，砸完后可以利用橄榄球技能快速逃脱;但缺点也很突出，整体破译速度极大降低。因此核心天赋上，推荐“巨力”、“求生意志”、“绝处逢生”，让其拥有更强的能力，去正面对抗屠夫，为队友争取更多时间。

巨力：巨大的力量使你用木板击中监管者后，监管者的眩晕恢复速率减少10%/15%/20%

求生意志：背上挣扎速度增加5%/10%/15%

绝处逢生：倒地后可以突破自愈上限，自行恢复到受伤状态;同场游戏中只能恢复1次

神棍

神棍能原地复制一个幻象隐身一段时间，屠夫砍爆幻象还会被标记，可以透视他，对局定位是“溜监管者”。神棍的优势在于，他的分身神技既可堵门挡屠夫，也能够救人挡刀，所以配合“破窗理论”、“膝跳反射” 、“云中漫步”、“化险为夷”、“悄无声息”这五大天赋，神棍能成为团队中最稳定、可靠的男人，这里分享个救人技巧，屠夫守尸时，神棍可瞬间点救人，然后瞬间分身离开，趁屠夫砍到分身擦刀的过程中，完成闪电救人。

破窗理论：跨越窗户后，冲刺时增加50%移动速度，持续3秒，冷却40秒

膝跳反射：跨越板子后，冲刺时增加30%/40%/50%移动速度，持续3秒，冷却60/50/40秒

云中漫步：留下的脚印持续时间减少1/15/2秒

化险为夷：当在处刑架上成功救下求生者后，自身和该求生者会进入20秒无敌时间，期间不会进入倒地状态，不能被治疗;期间受到的伤害将在无敌时间后会瞬间生效

悄无声息：当有其他求生者被挂上处刑架时，在处刑架18米半径范围内，自身跑动过程中不会留下脚印

机械师

机械师是极为讲究操作的角色，她的技能是可以操控傀儡作战，因此也是目前游戏中唯一可以双线操纵之人。机械师能够增加队友的破译速度，场上所有队友都健康的时候自身的破译速度也大大提升，还可利用傀儡去救人、去开门、自摸等等，可谓是万金油。但机械师缺点也很明显，板窗交互速度慢，被屠夫发现很难逃脱。天赋方面，利用“云中漫步”茍到底，“霍桑效应”和“羊群效应”则进一步提升整体破译速度。

云中漫步：留下的脚印持续时间减少1/15/2秒

霍桑效应：当其他求生者队友在8米范围内，每个队友增加玩家自身3%/35%/4%修复、治疗和破坏行动的速度

羊群效应：当其他求生者队友在8米范围内，增加范围内队友3%/5%/7%修复、治疗和破坏行动的速度

以上便是joker给大家分享的，关于园丁、前锋、神棍、机械师这四位求生者的天赋搭配推荐，下一回将会给大家介绍最后几位求生者的天赋使用攻略，敬请期待吧!

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抽血检测，一般用三代酶联合免疫法酶联免疫法，简称ELISA。它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。步骤：ELISA用血清来检测，首先血液要经过至少半个小时的凝集，然后取血清（这是有些网友不理解为什么医院抽完了血对血置之不理的原因，其实是误会）。将酶复合物用稀释液稀释后，加血清及阴性、阳性对照，还有就是质控品（这是严格的要求，它的范围必须在质控范围内）。经过一个小时的孵育，然后洗板，加底物，半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分，然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。严格的讲，如果第一次检测为阳性的话，无论是哪个实验室，必须按照CDC的HIV操作规程来进行第二次检测，第二次的方法必须与第一次的不同，如还是阳性，将送确认实验室确认。有的医院很不负责，将初筛阳性的报告发出后就不管了，这是不对的。必须经过确认实验室确认后才可出阳性诊断。祝大家。PS，第一次检测为阳性的话，一定要去确认实验室再做一次，勇敢的去面对，也许结果就不一样了。基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。具体方法有：（一）双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。（2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。（3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。（4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。（二）双位点一步法在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步（图15-5）。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。在一步法测定中，应注意钩状效应（hookeffect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。（三）间接法测抗体间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：（1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。（2）加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。（3）加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。（4）加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。（四）竞争法竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下：（1）将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。（2）待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。 （3）加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。（五）捕获法测IgM抗体血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法，先将所有血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下：（1）将抗人IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。洗涤。（2）加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。（3）加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。（4）加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。（5）加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应。（六）应用亲和素和生物素的ELISA亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。现在使用更多的是从链霉菌中提取的链霉和素（strepavidin）。生物素（biotin）又称维生素H，分子量24431，存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物，生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可大提高ELISA的敏感度。亲和素－生物素系统在ELISA中的应用有多种形式，可用于间接包被，亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，通过亲和素－生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。另外，在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连接亲和素－酶结合物，以放大反应信号。

1双抗体夹心法：

属于非竞争结合，检测抗原最常用的方法，检测含有至少两个抗原决定簇的多价抗原。原理是先将特异性抗体与固相载体连接；加入待测标本，形成固相抗原抗体复合物；再加入酶标抗体形成双抗体夹心，洗涤；加底物显色，根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量检测。

如血清标本中有类风湿因子（RF） 存在，则可出现假阳性反应，因为RF是一种抗变性IgG的自身抗体，它能与多种动物的变性IgG的Fc部分结合，因此RF就可作为固相抗体和酶标抗体之间的桥接抗原。

双抗体夹心法只适用于二价或以上的较大分子抗原的测定，不能用于小分子半抗原的检测。

2双位点一步法：

针对抗原分子上两个不同且空间距离较远的决定簇，包被使用一种单抗，酶标记使用另一种单抗。测定时将待测抗原和酶标抗体同时加入，温育、洗涤，加入底物显色。若待测抗原浓度过高时，过量的抗原可分别同固相抗体和酶标抗体结合而抑制夹心复合物的形成，出现钩状效应 ，显色降低，甚至假阴性。必要时可将标本经过适当稀释后重复测定。

3竞争法：

用于测定小分子抗原，如药物、激素 等。原理为先用抗小分子的特异性抗体包被固相，然后同时加入待测样本和酶标记的小分子 ，两种小分子竞争与固相上的抗小分子的特异性抗体结合，温育一定时间后洗涤，加入酶底物显色。

特点是：

①酶标记抗原与样品或标准品中的非标记抗原具有相同的与固相抗体结合的能力；

②反应体系中，固相抗体和酶标抗原是固定限量 ，且前者的结合位点少于酶标记和非标记抗原的分子数量和；

③免疫反应后，结合于固相载体上复合物中被测定的酶标抗原的量(酶活性)与样品或标准品中非标记抗原的浓度成反比。

基本流程：

使用笔型验孕棒进行验孕的基本流程为：将盖取下、

捏住手柄、吸取尿液、水平放置、观察显示窗口、判断结果。

使用的具体操作步骤：

1、沿包装铝箔切口部位撕开，取出测试笔,除去笔帽。

2、小便时让尿液直接淋在测试笔的吸尿区上，保持5—10秒种接尿时间。

3、盖上笔帽，平放测试笔。

4、3—5分钟内观察结果，5分钟后显示的结果无效。

检测的时间：

一般在月经预期前2天可以开始检测，最早可在预期前4—5天进行检测;任何时间的尿液均可用于检测，但晨尿(早起第一次)最佳，此时的尿液对刚刚怀孕的检测会更准确。

结果的判断：

阳性(怀孕)：两条红线，反应线(T)及控制线(C)同时出现红色，反应线颜色浅于控制线颜色时，表示可能刚怀孕，请隔天用晨尿重新检测确认;

阴性(未怀孕)：一条红线，仅出现控制线一条线;

无效：控制线不出现，表示检测错误或无效。

使用笔型验孕棒注意事项

1、若无红线出现表示测试错误或无效，请重新检测。

2、当HCG浓度很高时反应线会很明显，控制线可能变的很弱，为正常结果。

3、若尿液测试为阴性，而被测者仍怀疑有怀孕可能，可在48—72小时后重新收集尿液测定。

4、当HCG浓度超过一定标准时可能发生钩状效应(怀孕2—3个月)，检测结果可能显示阴性，应当将尿液稀释后再测。

5、子宫肿瘤、葡萄胎或更年期病人，因尿液中HCG含量较高，可能出现阳性结果，请结合临床实验诊断。

6、注射或服用助孕药会影响结果，所以需要注意。

早孕试纸多久能测出来

1、同房后等待精卵结合时间：1-3天。同房之后，精子还要通过一段时间才能和卵子汇合。有时候他可能要等上72个小时，等羞答答的卵子**成熟后出来(排卵)才能碰上结合。

2、受精卵穿过输卵管进入子宫的时间：3-4天。精卵成功结合后，受精卵一边发育一边经输卵管向子宫方向移动，大概3-4天后才能到子宫。

3、受精卵在子宫内游荡的时间：2~3天。受精卵进入子宫后，还要在里面游荡一段时间，才能找到落脚点，最后才在子宫里面着床。

4着床之后，受精卵通过胎盘和子宫相连了。胎盘就会产生HCG。HCG会出现在尿液里面，但是刚开始浓度很低，有时候早孕试纸会验不出来，或者只会验到一深一浅两道杠。其中淡的可能会非常淡，几乎看不出来。有人也称这个淡淡的杠为“水印”。

所以从同房到成功着床后，才能产生HCG。而大家可以把上面的天数相加一下就可以知道。同房后多久可以验出来怀孕了。

1如果受精早而着床也早的话，最早同房后大概需要7天尿液中才会有HCG，但是这个时候浓度很低，早孕试纸很难验出来。所以至少等2~3天浓度高一点，才可以看到一深一浅两条杠。所以最早10天左右早孕试纸可以验出怀孕。

2而如果排卵时间和着床时间都推迟了，那么有些人可能要在15天左右才能测出怀孕呢。

早孕试纸怎样使用才正确

很多网友第一次用试纸，心慌意乱各种期盼或者小激动。可能没有正确的使用早孕试纸，导致测试结果错误。所以最好做到以下几点，确保测试结果正确：

1、用晨尿(早上起床的`第一泡尿)检测，结果更加准确。

2、不要使用过期的早孕试纸(多留意看看包装上的日期)。

3、开封后的试纸要立刻使用，避免受潮后检测结果不准。

4、严格按照说明书来使用。(沾上新鲜干净尿液后，将早孕试纸平放，5分钟内查看结果)

5、不要把排卵试纸和验孕试纸弄混啦(排卵试纸即使没怀孕也会出现双杠，叫男票或老公买的时候，别买错啦)。

影响早孕试纸验孕结果的因素

有时候明明是验到双杠了，但是去医院检查确实没有怀孕。或者前几天验是阴性，但是最后发现怀孕啦!!为什么还会出现这种假阴性或假阳性结果呢

大家要知道，早孕试纸只是验孕的“辅助”工具。确认怀孕的可能有90%。还有一部分假阴性或假阳性的结果可能是以下情况引起的。

1、早孕试纸如果过期或者受潮了，检测就可能失效，出现检测结果假阴性;

2、如果才刚刚怀孕，或者有异位妊娠(宫外孕)的可能，那么尿液里的HCG水平会很低。需要放置3分钟以上(一般仅需1分钟)才能观察结果，可能只是出现水印(不仔细看看不出，容易被忽略掉)。

3、在怀孕3个月后，HCG水平下降，尿液检测有时会出现阴性，或弱阳性;

4、在极端的情况下(如葡萄胎、绒癌)体内HCG水平会过高，尿液检测反而不显示阳性;

5、阳性结果也不一定表明百分百怀孕了。因为有些肿瘤细胞如葡萄胎、绒癌、支气管癌和肾癌等，也可分泌HCG。子宫内膜增生患者也有出现HCG检测阳性的可能性;

6、当HCG浓度超过50000 mIU/mL(一般在怀孕2-3个月)时可能发生钩状效应(即结果可能会呈现阴性)，应当稀释后再测;

7、子宫肿瘤、葡萄胎、习惯性流产、先兆性流产、宫外孕或更年期病人，可能会出现阳性结果，建议医生进一步确诊。

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