高中生物选修3关于凝胶色谱法的说法

根据我学到的生化知识。正确的应该是凝胶色谱是根据分子大小（也就是体积形状来分离的），说它是根据分子质量大小分离只是因为被分离的东西一般是蛋白质，而蛋白质的分子质量一般和其大小成正相关。

当不同分子大小的蛋白质流经凝胶层析柱时，比凝胶孔径大的分子不能进入凝胶珠内网状结构，被排阻在凝胶珠之外，随着溶剂在凝胶珠之间的孔隙向下移动，并最先流出柱外；比网孔小的分子能不同程度的自由进出凝胶珠的内外。这样由于不同大小的分子所经的路径不同而得到分离，大分子先被洗脱出来，小分子后被洗脱出来。

这个在高等教育出版社，王镜岩老师编的《生物化学》第301页 蛋白质的分离纯化原则上有详细解释。

至于你看到的练习和书本上为什么这样写，为了你考试能考高分，建议你拿我的答案和书上的区别去请教你们生物老师，得到他肯定的说法。

A、根据凝胶珠的颜色和形状检测凝胶珠的质量的好坏，如果得到的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠溶液浓度偏低，如果得到的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则可能的原因是海藻酸钾浓度偏高，A正确；

B、要将酵母细胞放在蒸馏水中进行活化处理，B正确；

C、如果海藻酸钠浓度过低，形成的凝胶珠颜色过浅，所包埋的酵母细胞数目较少，C错误；

D、实验成败的关键是配制海藻酸钠溶液，形成凝胶珠，D正确．

故选：C．

1、首先准备海盐酸纳、酵母以及氯化钠溶液以及一支注射管。

2、将酵母和海盐酸纳进行混合，用搅拌棒混合均匀。

3、在搅拌过程中会有絮状粘稠液体，一定要搅拌均匀，使之完全融合。

4、用注射器吸取一部分的酵母和海盐酸钠混合液体。

5、用注射器将溶液垂直滴入氯化钠溶液中（注意一定要垂直滴入）。

6、最后固定化酵母菌就成型了，可以进行其他的实验操作了。

（1）酵母菌在缺水状态下处于休眠状态．活化加入水使得酵母菌恢复正常的生活状态，酵母细胞活化时体积会增大，则活化前应选择足够大的容器，以避免酵母菌溢出容器外．

（2）实验成败的关键是配制海藻酸钠溶液，形成凝胶珠．

（3）如果海藻酸钠浓度过低，形成的凝胶珠颜色过浅，所包埋的酵母细胞数目较少．

（4）观察形成的凝胶珠的颜色和形状，如果颜色过浅，说明固定化酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，说明海藻酸钠浓度偏高，制作失败．

（5）细胞个体大，难以吸附或结合，而且不易从包埋材料中漏出，则固定化细胞一般采用包埋法固定．

（6）CaCl2溶液的作用是使胶体聚沉．

故答案为：

（1）缺水　正常的生活　体积会增大　

（2）配制海藻酸钠溶液　

（3）较少　

（4）固定化酵母细胞数目较少　海藻酸钠浓度偏高，制作失败　

（5）细胞个体大，不易从包埋材料中漏出　

（6）使胶体聚沉

分离纯化蛋白质的方法及原理 （一）利用分子大小 

1、透析：将待提纯蛋白质放在透析袋中放在蒸馏水中进行 。原理：利用蛋白质分子不能透过半透膜的性质，使蛋白质和其他小分子物质如无机盐、单糖、水等分开。 

2、超过滤：利用压力和离心力，强行使其他小分子和水通过半透膜，而蛋白质留在膜上。

3、凝胶过滤层析。原理：当不同分子大小的蛋白质混合物流进凝胶层析柱时，比凝胶网孔大的分子不能进入珠内网状结构，排阻在凝胶珠以外，在凝胶珠缝隙间隙中向下移动。而比孔小的分子不同程度地进入凝胶珠内，这样由于不同大小分子所经历的路径不同而到分离。

（二）利用溶解度差别 

4、等电点沉淀。原理：不同蛋白质具有不同的等电点，当蛋白质混合物调到其中一种蛋白质的等电点时，这种蛋白质大部分和全部被沉淀下来。 

5、盐析与盐溶 。原理：低浓度时，中性盐可以增加蛋白质溶解度这种现象称为盐溶当离子强度增加，足够高时，例如饱和或半饱和程度，很多蛋白质可以从水中沉淀出来，这种现象称为盐析。

（三）根据电荷不同 

6、SDS-PAGE 全称 十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳。原理：通过加热和SDS可以使蛋白质变性，多亚基的蛋白质也解离为单亚基，处理后的样品中肽链是处于无二硫键连接的，分离的状态。电泳时SDS-蛋白质复合物在凝胶中的迁移率不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而主要取决于蛋白质分子量。所以SDS-PAGE常用来分析蛋白质的纯度和大致测定蛋白质的分子量。 

7、离子交换层析。原理：氨基酸分离常用阳离子交换树脂，树脂被处理成钠型，将混合氨基酸上柱，氨基酸主要以阳离子形式存在，在树脂上与钠离子发生交换，而被挂在树脂上。

凝胶小孔的直径一定会对分离效果有影响。

当含有大小不同的蛋白质样品加到凝胶柱上时，比凝胶珠平均孔径小的蛋白质就要连续不断地穿入珠子的内部，这样的小分子不但其运动路程长，而且受到来自凝胶珠内部的阻力也很大，所以越小的蛋白质，把它们从柱子上洗脱下来所花费的时间越长！凝胶中只有很少的孔径可接受大的蛋白。因此，大的蛋白质直接通过凝胶珠之间的缝隙首先被洗脱下来。凝胶过滤所用的凝胶孔径大小的选择主要取决于要纯化的蛋白质分子量。

固定化酵母滴凝胶珠的圆步骤如下：

1、准备海盐酸纳、酵母以及氯化钠溶液以及一支注射管。

2、将酵母和海盐酸纳进行混合，用搅拌棒混合均匀。

3、在搅拌过程中会有絮状粘稠液体，要搅拌均匀，使之完全融合。

4、用注射器吸取一部分的酵母和海盐酸钠混合液体。

5、用注射器将溶液垂直滴入氯化钠溶液中注意一定要垂直滴入即可。

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