限制性内切酶如何切割，外源DNA怎么连上去

这一过程需借助两种酶：限制性核酸内切酶和DNA连接酶。

限制性核酸内切酶是可以识别特定的脱氧核苷酸序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。

DNA连接酶利用NAD或ATP中的能量催化两个核酸链之间形成磷酸二酯键。反应过程可分三步：

(1)NAD+或ATP将其腺苷酰基转移到DNA连接酶的一个赖氨酸残基的ε─氨基上形成共价的酶-腺苷酸中间物，同时释放出烟酰胺单核苷酸(NMN)或焦磷酸。

(2)将酶-腺苷酸中间物上的腺苷酰基再转移到DNA的5'-磷酸基端，形成一个焦磷酰衍生物，即DNA-腺苷酸;

(3)这个被激活的5'-磷酰基端可以和DNA的3'-OH端反应合成磷酸二酯键，同时释放出AMP。

限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）:识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。

限制性核酸内切酶的命名；一般是以微生物属名的第一个字母和种名的前两个字母组成，第四个字母表示菌株(品系)。例如，从Bacillusamylolique faciens H中提取的限制性内切酶称为BamH，在同一品系细菌中得到的识别不同碱基顺序的几种不同特异性的酶，可以编成不同的号，如HindII、HindIII，HpaI、HpaII，MboI、MboI等。

不可以

限制性核酸内切酶是识别并切割特异的双链dna序列的一种内切核酸酶。它能识别双链分子的某种特定核苷酸序列，使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，而且只能切割dna，不能切割rna。另外，根据酶的专一性也能得出答案

两者同属核酸酶，只是切割核酸的方式不一样而已。

凡能从多核苷酸链的末端开始水解核酸的酶称为核酸外切酶,凡能从多核苷酸链中间开始水解核酸的酶称为核酸内切酶。

而能识别特定的核苷酸顺序,并从特定位点水解核酸的内切酶称为限制性核酸内切酶(限制酶）

1、内切酶切的是指定的磷酸二酯键，目的是开链；外切酶切的是任意的磷酸二酯键，目的是水解DNA，获得单个的核苷酸。

2、核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。

3、它们不同于一般的脱氧核糖核酸酶（DNase）,它们的切点大多很严格，要求专一的核苷酸顺序——识别顺序。

扩展资料：

限制性核酸内切酶分布极广，几乎在所有细菌的属、种中都发现至少一种限制性内切酶，多者在一属中就有几十种，例如在嗜血杆菌属中（Haemophilus）现已发现的就有22种。

有的菌株含酶量极低，很难分离定性；然而在有的菌株中，酶含量极高．如E coli的pMB4(EcoRI酶）和H aegyptius(Hal Ⅲ酶）就是高产酶菌株。

据报道从10g的H aegyptius的细胞中，能分离提纯出可消化l0gλ噬茵体DNA的酶量。到目前为止，细菌是限制性内切酶，尤其是特异性非常强的I类限制性内切酶的主要来源。

参考资料：

百度百科-核酸内切酶

参考资料：

百度百科-外切酶

限制性核酸内切酶是从原核生物中分离纯化出来的。

解析：限制性核酸内切酶主要是从原核生物中分离纯化出来的，其化学本质是蛋白质，可以切割磷酸二酯键（用于切割含目的基因的DNA片段和切割质粒）。

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