需要染色后洗脱的细胞膜染色剂有哪些

对细胞膜染色需要的染料如下：

DiO(细胞膜绿色荧光探针)，呈现绿色荧光。

荧光素双醋酸酯（FDA），绿色荧光。

细胞染色方法：

PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色

是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。

annexin-v染色

细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变其中,磷脂酰丝氨酸

(Annexin-V,PS)外翻 ,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。

JC-1染色

JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性

(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由Ca2+、Na+和H+流调控。当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-l的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential)，而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1染色被用于检测凋亡的早期发生。其实验方法如下。

JC-l染色非常简单。首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1～5mg/ml)，储存于-20℃，用时以培养液稀释至10ug/ml终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接加入染色液，10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主，当红光信号增强时，红绿相叠，以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/绿信号强度，计算其强度比。

钙黄绿素-AM(Calcein-AM):

Calcein -AM本身并不是荧光分子，但通过活细胞内的酯酶作用，Calcein -AM能脱去AM基，产生的Calcein能发出强绿色荧光（激发：490 nm，发射：515 nm）。因此Calcein -AM仅对活细胞染色

细胞活力鉴定——台盼蓝染色法

原理：

细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。

用品：

1 4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至04%。 2 吸管、血细胞计数板、显微镜

步骤：

1、制备单细胞悬液。并作适当稀释（106 细胞/ml） 2、染色：细胞悬液与04%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。 3、计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞

台盼蓝染色原理

通常认为细胞膜丧失完整性，细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完整性丧失，通透性增加，细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析。

试述台盼蓝染发鉴别死活细胞的原理，试分析染色时间过长本来是活细胞也被染色的原因。死细胞的细胞膜无屏障作用，台盼蓝马上进入细胞而显蓝色。活细胞细胞膜有选择透性，对台盼蓝的透性小，进入细胞慢。若染色时间过长，台盼蓝可能通过胞吞或胞饮作用进入细胞。

细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA

结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性，

通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。这被称为染料排除测试。

通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞，并可使用细胞计数器进行计数。

通常认为细胞膜丧失完整性，细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝(TrypanBlue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完整性丧失，通透性增加，细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜

，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析。

台盼蓝可溶于水（10mg/ml)，可用蒸馏水配置。

称取4g台_蓝加双蒸水100ml，研磨溶解，离心后取上清，然后，与18%氯化钠1：1稀释，配成2%台_蓝工作液。

台盼蓝可被巨噬细胞吞噬，故可用于巨噬细胞的活体染色剂，凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

细胞培养常用的染色液有HE染色液H oechst 33258染色液(即用型)H oechst 33258染色液(即用型)，H oechst 33342染色液(即用型)，H oechst 33342染色液(即用型)，台盼蓝染色液(0 4% )，姬姆萨工作液，姬姆萨原液，瑞氏-姬姆萨复合染液，瑞氏染液，结晶紫染色液(2 5% )，结晶紫染色液(1% )，结晶紫染色液(0 1% )，可以试一下索莱宝的H oechst 33342染色液(即用型），效果还是比较不错的，价格可能会贵一点，但是具体还是要看培养的是细胞是什么样的，根据细胞去选择合适的染色液。

染色原理 正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内。

正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

正常细胞具有完整的细胞膜结构，而死亡的细胞其细胞膜结构被破坏。台盼蓝无法通过正常的细胞膜因而正常的细胞不被台盼蓝染上，而死细胞则可被台盼蓝染成蓝色。

台盼蓝染色分辨死活细胞的原理是什么

活细胞不会被台盼蓝染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。

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