纸层析与气相色谱法的联系与区别

原理一样，发生反应的地方不同。

原理都是利用不同物质在色谱分离系统中固定相与流动相中分配系数的差异，气相色谱法是在柱状填料中进行的，而纸层析则是在薄层介质上进行的。

纸层析法又称纸色谱法，是一种以滤纸为载体（又称支持物，主要成分是纤维素，多羟基，有亲水性）的层析分离方法。气相色谱方法是一种以气体作为流动相的色谱分析方法，是最重要的色谱法之一。

滤纸：剪层析滤纸,点样等过程中要注意尽量不用手接触样品要经过的地方；因为纸层析比较灵敏,手上的一些物质也可能会显示,干扰结果

点样：不要损伤点样处的滤纸,不要让原点直径大于5mm,样品含量不能超过滤纸承载量；否则会出现层析点太大不能分开或拖尾严重

层析液不能没过原线,滤纸要放平,不能和层析缸壁及其他滤纸（如果有）贴在一起,注意保持溶剂前沿,不要让层析液超过了滤纸最上边（大多数情况要求）

其他：注意用铅笔在滤纸上角做记号,别搞得分不清左右；完成后显色后,注意标记（铅笔）前沿和层析点

纸层析法又称纸色谱法。以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如GC、HPLC应用普遍。纸层析法可分为一般纸层析法，圆形纸层析法、反相纸层析法和双向纸层析法。等

用途

通常可用于叶绿素的色素成分检验，氨基酸的鉴定及测定，橘皮精油成分检验及一些特定细胞筛查等实验。

原理

纸层析法依据极性相似相溶原理，是以滤纸纤维的结合水为固定相，而以有机溶剂作为流动相。由于样品中各物质分配系数不同，因而扩散速度不同，从而达到分离的目的。 试样经层析后可用比移值（Rf）表示各组成成分的位置（比移值=原点中心至色谱斑点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离之比），由于影响比移值的因素较多，因此一般采用在相同实验条件下对照物质对比以确定其异同。作为单体鉴别时，试样所显主色谱斑点的颜色（或荧光）与供置，应与对照（标准）样所显主色的谱斑点或供试品-对照品（1∶1）混合所显的主色谱斑点相同。作为质量指标（纯度）检查时，可取一定量的试样，经展开后，按各单体的规定，检视其所显杂质色谱斑点的个数或呈色（或荧光）的强度。作为含量测定时，可将色谱斑点剪下洗脱后，再用适宜的方法测定，也可用色谱扫描仪测定。

色谱系统

固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。

编辑本段应用

操作方法

将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。

应用及实例介绍

在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如GC、HPLC应用普遍。在做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体与层析液（石油醚）混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。由此观查出各种色素的相对含量和种类。 纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、

[1]叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤 纸上扩散地快，反之则慢；含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法 能清楚地将叶绿体中的色素分离。

注意事项

纸层析法中所用的有机溶剂如丙酮等，一般有挥发性、并有一定毒性，使用时要注意密封层析，避免吸入过多有害挥发物。

编辑本段实验

仪器药品

大试管 台天平 研钵(配带孔纸板,防止丙酮挥发) 量筒 烧杯 漏斗 软木塞 滤纸 丙酮（可用无水乙醇替代） 四氯化碳 无水硫酸钠 碳酸钙 石英砂

操作步骤

1．称取新鲜叶子2g，放入研钵中加丙酮5ml，少许碳酸钙(防止叶绿素被破坏）和石英砂（帮助研磨），研磨成匀浆，再加丙酮5ml，然后以漏斗过滤之，即为色素提取液。 2．取准备好的滤纸条（2×20cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约15cm，宽约05cm的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。 3．用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，注意要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。 4．在大试管中加入四氯化碳3梍5ml及少许无水硫酸钠（即层析液）。然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。 经过05—1小时后，观察分离后色素带的分布。最上端橙**为胡萝卜素，其次**为叶黄素，再下面蓝绿色为叶绿素a，最后的黄绿色为叶绿素b。[1]

普通高中相关实验

植物叶绿体中色素的提取与分离 用具：剪刀一把、干燥的定性滤纸、50ml的烧杯及100ml的烧杯各3个、白纸3张、试管架一个、研钵一个、玻璃漏斗一个、尼龙布或纱布、毛细血管一只、药勺一个、10ml量筒一只，天平一只，试管3支、纸板一块、棉塞3个、培养皿3个、刻度尺、注射器一只、盖玻片 试剂：丙酮、无水乙醇、层吸液（20份石油醚、2份丙酮、1份苯配置而成）、二氧化硅、碳酸钙、碳酸钠 材料：新鲜的菠菜叶、青菜叶、大叶黄杨叶片 背景资料： 1、 叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿素等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂而不用水。 2、 叶绿素分布于基粒的片层薄膜上，加入少许二氧化硅是为了磨碎细胞壁、质膜、叶绿体被膜和光合片成，使色素溶解于丙酮中。 3、 破碎的细胞中含有草酸等有机酸，叶绿素分子中含有的Mg元素处于不稳定化合态，镁离子与有机酸结合将导致色素分子破坏。加入少许碳酸钙使得钙离子与有机酸结合，减少镁离子的转移，防止研磨时叶绿体色素的破坏。所以在研磨时加入适量的碳酸钙，同时加入碳酸钠的道理亦如此。 4、 在过滤时选用脱脂棉或纱布，而不用滤纸。原因主要有下：（1）色素分子比较大，不容易透过滤纸； （2）滤纸有较强的吸附性而使色素吸附在滤纸上，从而降低色素浓度，影响实验效果；（3）叶绿素是脂溶性，根据相似相容的原理，脱脂棉可以减少实验过程中色素的流失，增强实验效果。 5、 根据物理学中的毛细现象，画滤纸细线前滤纸必须经过干燥处理，是为了阻止水分子堵塞滤纸中的毛细管而影响层析液的扩散。但如果用火烤的话，会使滤纸纤维变形同时破坏啦毛细管，而影响层析液的扩散。 6、 由于液面的不同位置表面张力不同，纸条接近液面时，其边缘的表面的张力较大，层析液沿滤纸边缘扩散过快，而导致色素带分离不整齐的现象。故而，在插入层析液的滤纸条一端剪去两个角。 7、 为了防止滤纸条倒入层析液中而使层析实验失败。同时，防止因液体表面张力引起层析液沿滤纸条向上的“壁流”而导致色素溶解。 8、 色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。

纸层析法的介质是纸而层析除了纸层析外还有凝胶层析，毛细管层析等。

层析法：又称色层分析法或色谱法，是利用混合物中各组成部分物理化学性质的差异，如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等，使各组成部分在两相中的分布程度不同。一相为固定的，称为固定相，另一相流过固定相，称为流动相，从而使各组成部分以不同的速度移动而达到分离的目的。

纸层析法：又称纸色谱法，是用纸作为载体的一种色谱法，其应用的原理是相似相溶原理，是通过分裂相的在同一介质中分散速度不同来分析的。固定相一般为纸纤

在纸层析法中，展开剂的液面高出滤纸上的样点，展开剂溶解样品不会出现斑点，斑点分散在背景中产生拖尾。

由于液面的不同位置表面张力不同，纸条接近液面时，其边缘的表面的张力较大，层析液沿滤纸边缘扩散过快，而导致色素带分离不整齐的现象。故而，在插入层析液的滤纸条一端剪去两个角。

为了防止滤纸条倒入层析液中而使层析实验失败。同时，防止因液体表面张力引起层析液沿滤纸条向上的“壁流”而导致色素溶解。

扩展资料

在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如GC、HPLC应用普遍。在做叶绿体色素分离时用到，将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体与层析液（石油醚）混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。由此观查出各种色素的相对含量和种类。

纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、

叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快，反之则慢；含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法能清楚地将叶绿体中的色素分离。

纸层析法又称纸色谱法。以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。

上升纸层析法相信如果楼主上了生物就会做了，叶绿素的分离用的就是上升纸层析法……就是把流动相（叶子的汁）涂成一条直线，然后把定性试纸一部分插入层析液中，让层析液利用毛细现象爬上来，然后分层

径向层析法是把流动相涂成一个圆，然后把层析液点在中间，然后层析液扩散出去的时候形成大小不一，颜色不一的圆，即色环。

补充回答：是的

谷氨酸为酸性（极性）氨基酸，丙氨酸为非极性氨基酸。于是在以极性有机溶剂（酒精）为展层剂的的流动相中，非极性的迁移快，而谷氨酸在乙醇的分配系数比丙氨酸大，迁移率慢。

纸层析法依据极性相似相溶原理，是以滤纸纤维的结合水为固定相，而以有机溶剂作为流动相。由于样品中各物质分配系数不同，因而扩散速度不同，从而达到分离的目的。

试样经层析后可用比移值（Rf）表示各组成成分的位置（比移值＝原点中心至色谱斑点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离之比），由于影响比移值的因素较多，因此一般采用在相同实验条件下对照物质对比以确定其异同。

扩展资料：

叶绿体中色素的分离一般采用纸色谱法，主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b，它们在色谱溶液中的溶解度不同。含量越高的色素带也越宽。最后在滤纸上留下4条色素条，采用纸色谱法。

颜料分离原理：纸色谱是一种以滤纸为载体的色谱分析方法。其原理主要是利用混合物中的成分。流动相和固定相的分布比（溶解度）使它们分离。滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维通常能吸附约20％的水），乙醇等有机溶剂为流动相，色素提取液为色谱样品。

参考资料来源：百度百科——纸层析法

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