怎样利用共聚焦显微镜反复获得荧光和明场图像

怎样利用共聚焦显微镜反复获得荧光和明场图像,第1张

提供一个简单的思路:将

荧光探针

标记的样本在特定波长的荧光(激光)下照射,每隔一段时间拍一张照片(如每隔5分钟拍一次),期间显微镜的参数不要改变。用Photoshop统计所拍照片荧光强度,比较不同照射时间荧光探针的荧光强度,荧光强度越接近,探针的稳定性越好。

您要问的是徕卡显微镜拍明场为什么是绿色的吗?荧光分子处于激发态。

明场在成像过程中靠透射光直接成像,背景为亮,目标为暗。徕卡显微镜自带荧光发光,随意在光线较强的情况下,荧光分子处于激发态,拍出来的就会是绿色。

徕卡生物显微镜对于生物、医学或其他学科显微观察和照相工作的显微镜工作者来说,是不可缺少的一部分。

首先打开荧光开关,注意打开半小时后才可以关。

打开明场的开关,检查遮光镜是不是在正确的位置

在明场下观察片子,找到正确的视野

启用荧光前加上玻璃片挡荧光

将遮光镜调到荧光可以看到的位置

先看DAPI,再看GFP

调到照相和相机的位置实时观察,拍照

关闭明场前先把光强降到最小

将物镜降下去,调到4x,然后关明场开关

检查到了半小时后关荧光开关

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