半定量PCR和荧光定量PCR有什么不同

半定量PCR和荧光定量PCR有什么不同,第1张

完全两个不同的概念,梯度pcr是指你的pcr仪在设置的时候可以同一时间不同位置设置一个从高到低的温度梯度,以便在不知道退火温度的情况下选择一个最适宜的退火温度。二实时荧光定量pcr是通过再pcr过程中掺入荧光染料或释放荧光基团,从而对模板进行相对定量或绝对定量的实验,在实时荧光定量pcr时也可以设置梯度,总的来说实时荧光定量pcr是一种实验方法,而梯度pcr是一种实验手段

半定量RT-PCR一般是在没有条件做 实时PCR 的情况下使用,用于测定体内目的基因的表达增加减少与否,即通过目的基因跑出来的电泳带与管家基因(如β-actin)的电泳带的相对含量比较,观测目的基因表达增减,另外还要做一个β-actin的内参照对照。

管家蛋白基因就是细胞内一些表达比较稳定的基因,如β-actin在各种细胞内的含量都稳定在10%左右。因此研究的目的基因的表达量与这些比较恒定含量的基因一比较,就可以观察到目的基因是否随着时间改变了~~~

研究人员常常需要检测特定基因的表达水平,检测的手段很多,主要有Northern, 半定量RT-PCR, 荧光定量PCR(real time PCR),基因芯片的手段。很难用几行字来说清楚这些技术的优缺点。

Northern方式比较直观,但是难以批量进行,劳动量较大;半定量RT-PCR,被一些学员所推崇,因为很多实验室都可以做,但是半定量RT-PCR的关键要保证所有样品的可比性非常困难,内参需要与待检测基因同管扩增,但是由于内参基因表达水平太高,常常抑制检测基因的扩增,常常是分开扩,都可以扩增出来,混在一起就没有了,所以有时不能反映基因表达的实际情况。目的基因和内参基因分开扩增的所谓半定量RT-PCR,没有什么学术意义。荧光定量PCR,在学术界和临床诊断都被广泛采用,该技术能比较真实反映基因的表达水平,实时监控PCR扩增,数据处理自动化和数字化。荧光定量PCR需要采用具有5-3外切酶活性的Taq酶扩增,合成一对普通引物和一条荧光双标记的Taq-Man探针。要准雀体现表达水平,半定量RT-PCR, 荧光定量PCR扩增的循环数比常规少,扩增产物一般都要求处在线性区,如果扩增过程已到达平台区,扩增产物就不能反映基因拷贝数的高低。基因芯片的基本原理和Northern 基本相同,类似于点杂交,都是采用杂交原理,差别是基因芯片一般采用荧光探针,可以同时比较很多样品,可以批量处理和自动化。不足之处是检测设备费用高,假阳性的比较高,需要其他方式予以验证。

半定量RT-PCR一般是在没有条件做 实时PCR 的情况下使用,用于测定体内目的基因的表达增加减少与否,即通过目的基因跑出来的电泳带与管家基因(如β-actin)的电泳带的相对含量比较,观测目的基因表达增减,另外还要做一个β-actin的内参照对照。

管家蛋白基因就是细胞内一些表达比较稳定的基因,如β-actin在各种细胞内的含量都稳定在10%左右。因此研究的目的基因的表达量与这些比较恒定含量的基因一比较,就可以观察到目的基因是否随着时间改变了~~~

半定量RT-PCR与定量RT-PCR的区别是半定量RT-PCR操作简便,可快速推测样品中特异mRNA的相对数量;而定量RT-PCB可实时定量,较半定RT-PCB更准确。

半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。

定量RT-PCR(quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,qRT-PCR)是在用一步法或两步法,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

碘盐半定量如果阳性,为有碘食盐,根据颜色可粗略估计碘含量;但是有碘不代表合格,合格碘盐必须达到标准要求含量才算合格碘盐。

碘作为人体内一种重要的营养元素,在维持机体健康的过程中发挥着重要的作用。碘的生理功能包括:促进生物氧化、调节蛋白质合成和分解、促进糖和脂肪代谢、调节水盐代谢、促进维生素的吸收利用、增强酶的活力和促进生长发育。

扩展资料:

将碘盐加入氧化剂后再加入淀粉,如显蓝色,是真碘盐;如蓝色浅,无蓝色,不是碘盐。

加碘食盐都用的碘酸钾,碘盐的测定加碘食盐都用的碘酸钾取样加酸和KI溶液再用淀粉溶液滴定,当溶液由无色恰好变成蓝色,记录淀粉溶液的用量和锥形瓶中待测液的用量,计算可的I2的含量,从而得碘酸钾的含量科学使用碘盐碘盐可有效地预防碘缺乏病。我们要科学地食用碘盐,以提高碘的利用率。

参考资料来源:百度百科-碘盐

有,基本是半定量我们平时做的RT-PCR,可以说是半定量的,还有现在比较流行的real time PCR基本可以说是定量的,其实也并不是非常非常准的,一般的PCR都是后定量,real 是前定量,是检测没一个循环的量故名的来的一般都是SYBR染色,再准确点的是taqman探针具体你可以查一下

以上就是关于半定量PCR和荧光定量PCR有什么不同全部的内容,包括:半定量PCR和荧光定量PCR有什么不同、什么是半定量 RT- PCR、半定量pcr注意事项等相关内容解答,如果想了解更多相关内容,可以关注我们,你们的支持是我们更新的动力!

欢迎分享,转载请注明来源:聚客百科

原文地址: http://juke.outofmemory.cn/life/3767474.html

()
打赏 微信扫一扫 微信扫一扫 支付宝扫一扫 支付宝扫一扫
上一篇 2023-05-02
下一篇 2023-05-02

发表评论

登录后才能评论

评论列表(0条)

保存