请问制备培养基时如何过滤除菌

1、灭菌方法

培养基的灭菌方法主要有两种，高压除菌及022um微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比，高压灭菌的工作强度小，成本较低，但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中容易造成二次污染。大多数培养基采用01～02μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌，并且已成为培养基除菌的发展方向，它可低限度地减少培养基的营养损失。

11 高压灭菌

某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺。

可高压灭菌的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。

12 过滤灭菌

可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。一般情况下采取正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有流速高、过滤快、不易污染，可避免蛋白质产生大量气泡等优点。一般使用过滤器可参照各供应商的产品说明书。

目前大多数实验室和制药企业采用微孔滤膜滤器（如Zeiss滤器）或立式微孔滤器（Millipore、Pall）除菌。微孔滤膜滤器为不锈钢，中间可夹放022um滤膜。使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。如在使用Zeiss滤器时，先要用培养用水将滤膜充分润湿，在安装滤膜时可在其上放置一层定性滤纸再固定。消毒时旋钮不要扭太紧，凡与空气接触部位都要包好（可用牛皮纸、纱布、无纺布等）；高压灭菌后，在无菌环境中立即将旋钮扭紧。过滤除菌结束后，要打开滤器，检查滤膜是否完整，如果滤膜破裂，需重新进行过滤除菌过程。立式微孔滤器可以选用不同的微孔滤柱体积，因为滤膜的折叠，膜面积显著增大，液体处理量大，而且不容易发生堵塞现象。

空气除菌一般有加热灭菌、静电除菌和介质过滤除菌三种，目前国内广泛采用介质过滤除菌。

(1)加热灭菌即将空气加热到一定温度后，保温一定时间，将微生物杀死的方法。美国某发酵厂采用提高进El空气的温度，经压缩后达220~C，保特15 S，达到灭菌目的。国内水冷式空压机出口空气的温度为120—140~C，风冷式空压机出口空气的温度为140-160~C，也有一定的杀菌作用。

(2)静电除菌它是利用静电引力吸附带电粒子，而达到除菌除尘的目的。将交流电电压提高到2～5万V，经整流变成直流电。当气体通过时，在强的电场(>7000V／era )作用下形成电离作用，产生带正负电荷的离子，并分别向正负电极移动，在移动的过程中又使灰尘、微生物带电，而被电极所吸附。

(3)介质过滤除菌介质过滤除菌是目前国内外发酵工业上普遍使用的空气除菌方法。它是使空气通过经高温灭菌的介质过滤层，将空气中的微生物等颗粒阻截在介质层中，而达到除菌目的。

高压灭菌锅。

根据查询实验室安全知识显示，过滤除菌操作时滤器和过滤瓶等装置使用前高压灭菌锅消毒灭菌。

高压灭菌锅又名高压蒸汽灭菌锅，可分为手提式灭菌锅和立式高压灭菌锅。

除菌过滤器主要是采用大比表面积，过滤精度为022μm以上的微滤滤芯，主要用于防止空气中的杂质和有害细菌、微生物等进入罐体、生产线、无菌室等，引起水质、产品和无菌室环境的变化，满足食品、生化、饮料、啤酒、医药、电子等行业的工艺需要。

用于水处理的罐体的罐内环境保护，防止罐体内水体受到来自空气的污染的过滤器。

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